人乳头瘤病毒6bL1双顺反子载体的构建及其在哺乳动物细胞内的表达

摘要：

目的构建尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒6b型晚期基因(HPV6b L1)的双顺反子表达载体,并使其在哺乳动物细胞内表达,以期建立含有HPV6b L1的细胞模型.方法表达质粒pEGFP-HPV6bL1经双酶切纯化后与经过相同双酶切的真核表达质粒pIRES2-EGFP连接,酶切鉴定,挑选阳性克隆进行测序.重组质粒pIRES2-HPV6bL1-EGFP转染进小鼠成纤维细胞(NIH3T3),荧光显微镜下观察EGFP蛋白的表达.RT-PCR检测HPV6b L1 mRNA的生成.结果成功构建含HPV6b L1的重组质粒pIRES2-HPV6bL1-EGFP.重组体成功转染进NIH3T3细胞,并用G418筛选.同时荧光倒置显微镜下可观察到细胞内有绿色荧光蛋白的表达.进一步进行RT-PCR,检测到HPV6b L1 mRNA的生成.结论成功构建携带HPV6b L1的重组体pIRES2-HPV6bL1-EGFP并转染入NIH3T3细胞.经荧光倒置显微镜观察及RT-PCR方法检测证明HPV6b L1在NIH3T3细胞内成功表达.

机标关键词：人乳头瘤病毒、双顺反子载体、构建、哺乳动物、细胞内、双顺反子表达载体、human papillomavirus、bicistronic expression vector、HPV、mammalian cells、recombinant plasmid、EGFP、NIH3T3细胞、RT-PCR、eukaryotic expression vector、green fluorescent protein、fluorescent microscopy、reverse transcription、recombinant vector、identification of

所属期刊栏目：44

分类号：R378(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：广东省自然科学基金04021019;暨南大学自然科学基金团队项目620026

在线出版日期：2011-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：347-349