不同RNA干预技术对人乳头瘤病毒11型E7基因的沉默作用

摘要：

目的 探讨RNA干预技术的两种形式在体外对人乳头瘤病毒(HPV)11型E7基因的沉默作用.方法 化学合成1对小片段干扰RNA(siRNA-11E7),同时构建3个短发夹状小RNA(shRNA)表达质粒(pRNAT-11E7 1#、2#、3#),分别转染稳定表达HPV11E7的C57BL/6小鼠黑素瘤细胞系B16细胞株,采用实时荧光定量PCR技术检测细胞转染前后靶基因mRNA的表达水平.结果 siRNA-11E7转染细胞后6、12、24、48、72、96、120 h对靶基因表达的抑制率分别为12.60%、31.41%、41.93%、42.93%、74.35%、32.71%、29.00%;最佳作用浓度为25 nmol/L(抑制率70.06%),最低作用浓度可至3.13 nmol/L(抑制率47.00%).以0.4 μg pRNAT-11E7 1#、2#、3#及上述3个质粒等量混合转染细胞72 h后对靶基因表达的抑制率分别达44.52%、59.26%、89.62%、54.09%,阴性质粒无干预作用.pRNAT-11E7 3#作用6、12、24、48、72、96、120 h对靶基因表达抑制率分别为0、17.50%、40.90%、42.40%、61.90%、51 50%、0%;最佳作用剂量0.2 μg.结论 siRNA及shRNA表达载体均可在体外安全高效地沉默HPV11E7基因的表达,其干预作用存在一定的量效性和时效性,且可能存在最佳作用浓度(剂量)和最佳作用时间.

关键词：基因沉默、RNA干预、乳头状瘤病毒、人

所属期刊栏目：40

分类号：R73(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金30371289

在线出版日期：2008-03-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：267-270