短发卡RNA对人黑素瘤细胞BRAF基因的沉默作用

摘要：

目的 构建BRAF基因序列特异性的短发卡RNA(shRNA)质粒载体,检测其对人黑素瘤细胞BRAF基因的干扰作用.方法 设计2条BRAF基因序列特异性的shRNA编码序列和1条非特异性阴性对照序列,插入质粒pGenesil-1,双酶切和测序鉴定.用构建成功的3条质粒转染人黑素瘤细胞株A375和M14,分别采用RT-PCR和蛋白印迹检测其BRAF基因的mRNA和蛋白表达.结果 所设计的shRNA序列被正确插入质粒pGenesil-1.非特异性对照质粒neg对黑素瘤细胞BRAF基因表达不产生干扰,2条序列特异性质粒braf 1和braf2抑制了BRAF基因mRNA和蛋白的表达,其中braf 1干扰效果最为明显,最高抑制率可达90%.结论 质粒介导的shRNA可成功干扰人黑素瘤细胞BRAF基因的表达,其抑制时间可持续至少1个月.

关键词：黑色素瘤、RNA干扰、BRAF基因、shRNA

所属期刊栏目：39

分类号：R73(肿瘤学)

在线出版日期：2006-12-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：625-628