基于PCR的两步法丝状真菌基因敲除方法

摘要：

基因敲除是研究真菌基因功能的重要方法之一,目前,丝状真菌敲除多采用基因两侧的同源臂对基因组的靶标进行同源替换,然后采用抗生素对转化子进行筛选,但这存在着筛选效率低、假阳性率高、操作复杂等问题.本研究以稻瘟菌为研究对象,采取以下步骤对此进行优化:1)构建HPH-GFP(潮霉素-绿色荧光蛋白)融合表达载体;2)分别用带有接头序列的引物克隆待敲除基因上、下游片段;3)克隆上、下游片段与HPH-GFP组成嵌合体片段;4)嵌合体片段转化真菌原生质体;5)对敲除突变体进行筛选.结果 表明,该法操作简便、高效,除了用潮霉素HPH作为筛选标记外,还可用GFP作为荧光筛选标记,极大提高了筛选效率,可用作丝状真菌基因功能研究.

关键词：丝状真菌、基因敲除、稻瘟菌、PCR扩增

所属期刊栏目：38

分类号：S961.16(水产养殖技术)

资助基金：国家科技支撑计划项目2014 BAD 07 B 02;贵州省科技支撑黔科合支撑[2019]2408号;贵州省科技厅工程中心建设计划项目黔科合农G字[2012]4004号;贵州大学引进人才科研基金贵大人基合字[2017]54号

在线出版日期：2019-07-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：15-19