黄瓜DNA提取及其RAPD-PCR反应体系的优化

摘要：

利用改良的SDS方法提取黄瓜干种子与一步法提取的黄花苗总DNA进行RAPD扩增,其结果与传统的CTAB和SDS的结果一样.这两种方法不仅节约成本,且简单快速,大大降低了DNA的提取难度,适宜黄瓜杂交种子纯度鉴定.不同组织材料对RAPD无影响.研究了RAPD的影响因素,改进及优化了RAPD反应程序.结果表明:Mg2+浓度的范围为1.5～3.0mmol·L-1,dNTPs浓度范围为0.15～0.25mmol·L-1,Taq聚合酶浓度范围为0.5～1.5U,模板DNA浓度为20～100ng,反应以及引物浓度为0.2～0.4μmol·L-1.引物的碱基组成以及不同存放时间的引物对RAPD扩增也有影响.DNA预变性94℃进行4min,94℃变性30s,37℃退火30s,72℃延伸1min,循环35次后72℃再延伸7min.

关键词：黄瓜、DNA提取、RAPD-PCR

所属期刊栏目：23

分类号：S6(园艺)

资助基金：广东省自然科学基金

在线出版日期：2004-08-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：9-14