10.3969/j.issn.1001-1528.2022.08.059
阿胶不同酶解物HPLC指纹图谱建立
目的 建立阿胶多种酶解物HPLC指纹图谱.方法 对流动相选择、 酶种类筛选、 酶用量、 辅料、 试剂及酶干扰的考察,通过精密度、稳定性、重现性、验证性试验,以HPLC色谱图峰形、相似度等为指标,确定分析方法.Dikma C18色谱柱;流动相0.2 mol/L Na2 SO4-H3 PO4(pH 2.3)(A)-90％乙腈(B),梯度洗脱;体积流量1 mL/min;进样量20μL;检测波长280 nm.结果 取5％阿胶水炖化液,分别加入100000 U/g胃蛋白酶、25000万U/g胰蛋白酶、300000 U/g木瓜蛋白酶、25000 U/g糜蛋白酶,调pH后于40℃酶解4 h,接着95℃灭活20 min,依次用脱脂棉、定量滤纸、0.45μm微孔滤膜过滤,制成4个样品.阿胶辅料、加入试剂及胰蛋白酶对分析无干扰,其他酶需排除干扰.精密度及重现性图谱相似度>0.9,保留时间RSD<2％,多数峰面积RSD<10％.样品冷冻需不超过2 d.除胃蛋白酶外,其余3种酶解物保留时间RSD<2％,相似度>0.9.结论 采用不同蛋白酶的酶解产物作为样品进行特征谱带研究,其信息量更大,且由于酶切位点固定,各样品的酶解物组成相对稳定.为后续进行的酶解物-HPLC法对阿胶特征峰及规律研究提供参考.
阿胶、酶解、HPLC、指纹图谱、方法学
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R284.1(中药学)
国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家级大学生创新创业训练计划项目;济宁医学院大学生创新训练计划项目
2022-09-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
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