桔梗中PgMCT和PgCMK的克隆及原核表达分析

摘要：

目的 从桔梗中克隆2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸胱氨酰转移酶(MCT)和4-(5'-焦磷酸胞苷)-2-C-甲基D-赤藓糖醇激酶(CMK)基因的全长cDNA序列,并进行生物信息学及原核表达分析.方法 根据桔梗转录组数据,通过RT-PCR方法从桔梗根中克隆得到PgMCT和PgCMK序列,利用生物信息学软件预测PgMCT和PgCMK蛋白的特征;利用ClustalW和MEGA 6.06软件构建PgMCT和PgCMK的系统进化树;构建原核表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达.结果 PgMCT和PgCMK基因ORF全长为954、1227 bp,分别编码317、408个氨基酸,均为不稳定蛋白.PgMCT和PgCMK蛋白的二级结构中,均为无规卷曲所占比例最高.结构功能域分析PgMCT和PgCMK分别属于糖基转移酶GT-A超家族和IspE超家族,推测这2个蛋白均为非跨膜蛋白.预测PgMCT和PgCMK蛋白均无跨膜结构,为非跨膜蛋白.SDS-PAGE结果显示,PgMCT和PgCMK诱导表达蛋白分别为55、50 kDa,与预期蛋白分子量一致.结论 本实验首次从桔梗中克隆出MCT和CMK(命名为PgMCT和PgCMK),为进一步探究桔梗三萜皂苷成分的生物合成奠定了物质基础.

关键词：桔梗、MCT、CMK、基因克隆、原核表达

所属期刊栏目：44

分类号：R966(药理学)

资助基金：国家自然科学基金;中央本级重大增减支项目

在线出版日期：2022-06-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1600-1605