10.13263/j.cnki.nja.2014.03.003
腺病毒介导的PTEN基因对前列腺癌细胞株PC-3增殖及cyclin D1、p21表达的影响
目的:构建携带抑癌基因PTEN的腺病毒载体,探讨PTEN基因对前列腺癌细胞株PC-3增殖及cyc-lin D1、p21表达的影响. 方法:采用RT-PCR方法从大鼠海马神经元扩增目的基因PTEN,连接入pENTR2A载体,在293A细胞中进行重组腺病毒的包装及扩增.以携带PTEN基因的腺病毒载体感染体外培养的前列腺癌细胞株PC-3.采用间接免疫荧光法检测细胞中PTEN的过表达情况.Western印迹检测PTEN、cyclin D1和p21表达的变化,通过细胞生长实验、平板克隆实验检测PTEN对PC-3细胞增殖能力的影响. 结果:成功构建重组腺病毒载体Ad-PTEN; PC-3细胞经Ad-PTEN感染后PTEN蛋白表达水平明显增加.Western印迹实验所得条带进行灰度值分析后与β-actin求比值,PTEN蛋白在Ad-PTEN感染组细胞中表达(0.215 ±0.065)明显高于对照组[(0.052±0.009),t=4.30,P＜0.05]和Ad-LacZ组[(0.056 ±0.008),t=4.21,P＜0.05].cyclin D1蛋白在Ad-PTEN感染组细胞中表达(0.256 ±0.072)明显低于对照组[(0.502±0.087,t=3.77,P＜0.05)]和Ad-LacZ组[(0.498±0.081,t=3.87,P＜0.05)].p21蛋白在Ad-PTEN感染组细胞中表达(0.589 ±0.076)明显高于对照组[(0.146±0.026,t=9.55,P＜0.01)]和Ad-LacZ组[(0.163±0.024,t=9.26,P＜0.01)].MTT实验显示Ad-PTEN对PC-3细胞的抑制作用自48 h后(21.98％)有显著性(t=6.80,P＜0.01).平板克隆实验显示Ad-PTEN组克隆形成率[(37.4±4.18)％]明显低于对照组[(54.9±4.81)％,t=4.76,P＜0.01]及Ad-LacZ组[(56.5±5.42)％,t=4.83,P＜0.01]. 结论:通过腺病毒载体Ad-PTEN使PC-3细胞表达PTEN基因,可以明显抑制细胞的增殖,并可降低cyclin D1表达,同时增加p21的表达.
前列腺癌、PTEN基因、细胞增殖、腺病毒载体、细胞周期蛋白
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R737.25(肿瘤学)
国家自然科学基金重点项目81272812;a grant from the Key Project of National Natural Science Foundation of China81272812
2014-04-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
207-212
