不同温度对体外培养精原细胞精子发生相关基因的影响

摘要：

目的:在32℃、37℃温度下体外培养生精细胞,探讨两种温度对精原细胞增殖相关基因的影响,为进一步探讨体腔温度(37℃)导致精子发生障碍的机制提供依据. 方法:将分离的大鼠生精细胞分别置于不同温度(32℃、37℃)条件下与支持细胞进行体外共培养,观察其贴壁、增殖、形态学变化；培养第8天采用非连续Percoll密度梯度离心、差异性贴壁分离富集出精原细胞,以实时定量PCR和Western印迹分别检测不同温度下精原细胞c-kit、PI3K的mRNA和蛋白表达水平的变化；对体外培养第8天的精原细胞c-kit基因进行测序检测,了解其突变情况. 结果:32℃组、37℃组均可见细胞贴壁、分裂、增殖；32℃组中,精原细胞c-kit和PI3K的mRNA及蛋白表达量均显著高于37℃组(P＜0.05)；基因测序结果显示32℃组c-kit基因第9、11、13号外显子均未见突变,37℃组第11、13号外显子未见突变,在9号外显子附近区域可能有缺失或插入突变. 结论:在体外37℃温度下培养生精细胞会抑制精原细胞增殖分化相关基因的表达,同时可能导致精原细胞c-kit基因发生突变.

关键词：精原细胞、温度、体外培养、c-kit、PI3K

所属期刊栏目：18

分类号：R321.1(人体形态学)

资助基金：贵州省优秀青年科技人才培养对象基金2009-26;遵义市重大科技项目培育与科技人才培养计划2009-05

在线出版日期：2012-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：135-139