有效抑制小鼠小胶质细胞上Toll样受体9表达的siRNA的筛选

摘要：

目的：筛选有效抑制小鼠小胶质细胞（ BV-2细胞）上Toll样受体9（ TLR9）表达的小干扰RNA（ siRNA）序列，并检测转染复合物的细胞毒性。方法设计并合成针对TLR9的3对siRNA （siRNA-836、siRNA-1549和siRNA-2410）及一条带绿色荧光标记（FAM）的通用阴性对照FAM-siRNA。在X-tremeGENE siRNA转染试剂介导下转染BV-2细胞。倒置荧光显微镜下观察转染后BV-2细胞FAM-siRNA的分布，流式细胞仪检测转染效率， q-PCR检测TLR9的mRNA表达， Western blot 检测TLR9蛋白的表达，并比较其抑制率，筛选出有效抑制靶基因表达的siRNA。 CCK-8检测细胞存活率的变化。结果 BV-2细胞转染FAM-siRNA后6 h，胞质内可见绿色荧光分布。 FAM-siRNA表达阳性率为（91.87±4.77）％。转染TLR9 siRNA后，BV-2细胞中TLR9 mRNA表达明显下降。与阴性对照组及序列 siRNA-836、siRNA-2410相比，序列 siRNA-1549的 TLR9沉默效能最高，使 BV-2细胞上TLR9 mRNA表达于24 h和48 h分别降低（77.89±4.23）％和（65.36±11.07）％， TLR9蛋白表达分别下降（48.37±20.56）％和（44.30±14.31）％。 CCK-8检测TLR9 siRNA转染组与对照组相应时间点比较，BV-2细胞存活率无明显变化（ P＞0.05）。结论序列siRNA-1549对BV-2细胞上TLR9表达的抑制效果最大，利用RNA干扰处理BV-2细胞，对细胞基本无毒性作用。

关键词：小神经胶质细胞、RNA、小分子干扰、Toll样受体9

分类号：R39;R73

资助基金：国家自然科学基金面上项目81171103；广东省自然科学基金S2011010006043

在线出版日期：2014-12-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：45-48