谷氨酸对胚胎大鼠神经干细胞巢蛋白表达的影响

摘要：

目的 探讨谷氨酸对体外培养的大鼠神经干细胞巢蛋白(Nestin)的影响.方法 取怀孕10d的SD大鼠胚胎海马组织,分离神经干细胞进行体外培养,置于含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮细胞生长因子(EGF)、B27的无血清培养基进行培养.传代至第2代,用免疫荧光细胞化学法检测神经干细胞特异性标志物Nestin的表达;培养液中添加5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)3h后检测其在神经干细胞中的表达;含血清不含神经生长因子的培养液中培养7d后经神经胶质酸性蛋白(GFAP)免疫荧光细胞化学法检测细胞分化情况.细胞传至第3代细胞后,经细胞计数后分为6组,A组为对照组,在B、C、D、E、F组培养液中分别加入浓度为200、400、600、800及1000μmol/L的谷氨酸.观察各组神经干细胞的增殖情况,应用聚合酶链式反应(PCR)技术检测各组中Nestin表达量的不同,应用统计学软件进行分析.结果 (1)细胞培养:胎鼠海马区分离培养的神经干细胞能很快增殖形成悬浮生长的圆形细胞球.经免疫荧光鉴定,细胞球Nestin抗体标记阳性.在培养液中加入BrdU后,BrdU能结合到细胞核中;诱导分化后,荧光鉴定GFAP标记阳性.(2)逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR):Nestin mRNA在各组之间表达亦具有显著差异(P＜0.05),其表达程度由高到低顺序与谷氨酸在各组中的浓度高低相一致:F组(2.2.21±0.42)、E组(1.99±0.37)、D组(1.58±0.26)、C组(1.36±0.41)、B组(1.05±0.34)、A对照组(0.83±0.21).结论 谷氨酸可以促进神经干细胞Nestin的表达,且在一定范围内表达量与谷氨酸浓度存在剂量依赖性.

关键词：谷氨酸、神经干细胞、胚胎大鼠、巢蛋白

所属期刊栏目：2

分类号：R74;R33

在线出版日期：2013-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：65-72