吡非尼酮对甲状腺相关眼病患者眼眶成纤维细胞功能的影响及机制

摘要：

目的 观察吡非尼酮对甲状腺相关眼病(thyroid associated ophthalmopathy,TAO)患者眼眶成纤维细胞(orbital fibroblast,OF)功能的影响及相关机制.方法 体外培养TAO患者OF,不同浓度(0、250、500、1 000μg/ml)吡非尼酮加入OF培养液中分别培养24、48、72 h,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测吡非尼酮对OF增殖的影响,台盼蓝染色法检测细胞存活状态.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGFβ1)的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测吡非尼酮对Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白分泌的影响.结果 (1)TAO眼外肌来源成纤维细胞原代培养成功并稳定传代;(2)各吡非尼酮药物浓度组均可抑制OF的增殖,250、500、1 000 μg/ml吡非尼酮处理72 h后各组增殖率分别为-15.31％、-24.92％、-48.53％,与对照组(0)比较差异均有统计学意义(P值均＜0.05),1 000 μg/ml浓度组抑制作用与其他两组差异有统计学意义(P＜0.05),同一浓度组作用不同时间的抑制作用差异无统计学意义(P＞0.05).250、500、1 000 μg/ml吡非尼酮处理72 h后成纤维细胞的存活率分别为79.21％、78.24％、76.28％,对照组细胞存活率为78.37％,差异无统计学意义(P＞0.05).(3) RT-qPCR结果显示,250、500、1 000 μg/ml吡非尼酮处理后各浓度组TGFβ1的mRNA相对表达量分别为0.760±0.010、0.440±0.006、0.290±0.002,与对照组(0.950±0.014)相比差异均有统计学意义(P值均＜0.05),吡非尼酮1 000 μg/ml组TGFβ1 mRNA表达水平明显低于其他两试验组(P＜0.05).各浓度组不同时间段比较差异无统计学意义(P＞0.05).ELISA结果显示,250、500、1 000 μg/ml吡非尼酮处理72 h后各浓度组Ⅰ型胶原蛋白分泌量分别为0.633±0.006,0.527±0.003,0.402±0.008,Ⅲ型胶原蛋白的分泌量分别为0.511±0.003,0.439±0.007,0.223±0.006,均低于对照组(0.794±0.005,0.527±0.007,P值均＜0.05),吡非尼酮1 000μg/ml组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的分泌量明显低于250、500 μ.g/ml组(P＜0.05).同浓度组不同时间段比较,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的分泌量无明显变化,差异无统计学意义.结论 (1)组织块贴壁法可成功培养TAO眼外肌来源成纤维细胞;(2)吡非尼酮抑制体外培养的TAO患者OF的增殖、TGFβ1的表达及胶原蛋白的分泌,吡非尼酮的抗纤维化作用可能与其相关.

关键词：甲状腺、吡非尼酮、眼眶成纤维细胞、转化生长因子

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在线出版日期：2019-04-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：185-190