重组缩短的葡萄球菌类肠毒素X蛋白克隆表达及催吐活性评价

摘要：

目的:分析缩短的葡萄球菌类肠毒素X（truncated Staphylococcal enterotoxin-like toxin X，tSElX）氨基酸多态性，对其进行克隆表达纯化并对催吐活性进行评价。方法:将
tselx序列与本课题组前期完成测序的145株CC398菌株基因组序列及NCBI数据库进行比对分析。设计引物扩增
tselx目的基因，将该片段重组于pMD18-T载体中并进行测序鉴定。经限制性内切酶
BamHⅠ和
EcoRⅠ双酶切后将目的片段构建于质粒pGEX-6P-1及pET-28a（+）中，重组质粒鉴定后，IPTG诱导蛋白表达。将以包涵体形式表达的蛋白进行变性和复性，用亲和层析法和超滤法对表达产物进行纯化。将纯化的tSElX蛋白以250 μg/kg喂饲普通狨猴，观察呕吐反应。
结果:tselx基因在我国不同来源（患者、健康人群和动物）的145株CC398菌株均存在。我国菌株编码蛋白的氨基酸序列同源性为100.0
%，与4株美国菌株的同源性分别为97.8
%（1株）和98.9
%（3株）。通过两套表达系统及不同诱导条件，tSElX均以包涵体形式表达。通过变性及复性，获得高纯度的可溶性重组蛋白tSElX。在250 μg/kg剂量下tSElX蛋白不能引起普通狨猴的呕吐反应。
结论:tSElX氨基酸序列在CC398菌株中普遍存在，且具有一定保守性。高纯度的可溶性tSElX重组蛋白在250 μg/kg剂量下不具有普通狨猴催吐活性。

关键词：肠毒素、重组蛋白、包涵体、复性、催吐活性

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资助基金：国家重点研发计划2018YFC1603800;国家自然科学基金面上项目81873959;传染病预防控制国家重点实验室青年创新人才基金2015SKLID510;National Key Research and Development Program of China2018YFC1603800;General Program of National Natural Science Foundation of China81873959;Youth Creative Talent Foundation of State Key Laboratory of Infectious Disease Prevention and Control2015SKLID510

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：567-570