非O1非O139群霍乱弧菌多重PCR和SYBR Green实时PCR检测方法的建立

摘要：

目的 建立检测非O1非O139群霍乱弧菌的多重PCR和SYBR Grcen实时PCR方法.方法 分别以霍乱弧菌的外膜蛋白基因(ompW)、O1和O139群O抗原编码基因(rfb)设计引物,建立多重PCR和SYBR Green实时PCR方法,评价两种方法检测非O1非O139群霍乱弧菌的特异性、重复性和一致性及最低检测菌量.结果 建立了检测非O1非O139群霍乱弧菌的多重PCR和SYBR Green实时PCR方法,根据特异性条带(多重PCR)和特异性熔解温度(SYBR Green实时PCR),两种方法均能特异性检测非O1非O139群霍乱弧菌,并能鉴别其他弧菌(5种)和肠道杆菌(3种);两种方法的最低检测菌量分别为7×104 c fu/ml(多重PCR)和7×102 cfu/ml (SYBRGreen实时PCR),差异有统计学意义(P＜0.05);对实时PCR的重复性检测,批内变异系数(CV)为0.22％ ～ 0.92％,批间CV为0.27％～1.41％;经370株非O1非O139群霍乱弧菌的检测,两种方法的一致性均为100％.结论 建立的两种方法其特异性、敏感性及重复性均好,可适用于不同条件下非O1非O139群霍乱弧菌的检测和鉴定.

关键词：非O1非O139群霍乱弧菌、多重PCR、SYBRGreen实时PCR

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资助基金：国家自然科学基金30872260;国家科技重大专项2008ZX10004-012 This study was supported by grants from the National Natural Science Foundation of China30872260;the National Special Science and Technology Project for Major Infectious Diseases of China2008ZX10004-012

在线出版日期：2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：66-70