问号钩端螺旋体lipL41基因表达及重组抗原分析

摘要：

目的构建问号钩端螺旋体(钩体)ltB/ctB-lipL41/1融合基因及其原核表达系统.方法采用连接引物聚合酶链反应(PCR)构建ltB-lipL41/1和ctB-lipL41/1融合基因,常规方法构建其原核表达系统.采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测目的重组蛋白rLTB-rLipL41/1和rCTB-rLipL41/1表达情况;用免疫印迹和神经节苷脂-酶联免疫吸附试验(GM1-ELISA)分别检测上述目的重组蛋白的免疫原性和佐剂活性;采用PCR和显微镜凝集试验(MAT)分别检测97株问号钩体野生株lipL41/1基因及其表达情况;用ELISA检测228例钩体患者血清lipL41基因产物的抗体.结果与报道的相关序列比较,ltB-lipL41/1和ctB-lipL41/1融合基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.6%～99.9%和99.8%～100%.rLTB-rLipL41/1和rCTB-rLipL41/1表达产量均约为细菌总蛋白的10%,主要以包涵体形式存在.rLTB-rLipL41/1和rCTB-rLipL41/1均分别能与rLipL41/1兔抗血清和牛GM1结合.87.6%(85/97)问号钩体野生株含有lipL41基因,84.5%(82/97)问号钩体野生株分别与rLipL41/1和rLipL41/2兔抗血清出现效价范围为1:4～1:128的MAT阳性结果.84.6%(193/228)和78.5%(179/228)的患者血清分别rLipL41/1和rLipL41/2抗体阳性.结论成功地构建了ltB-lipL41/1和ctB-lipL41/1融合基因及其原核表达系统.所表达的rLTB-rLipL41/1和rCTB-rLipL41/1融合蛋白有良好的免疫原性和佐剂活性.lipL41基因存在于不同问号钩体血清群中并高频率表达.rLTB-rLipL41/1和rCTB-rLipL41/1具有成为钩体属特异性疫苗抗原的良好前景.

关键词：问号钩端螺旋体、融合基因、分析

所属期刊栏目：26

分类号：R18(流行病学与防疫)

资助基金：中国科学院资助项目39970678

在线出版日期：2006-01-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：608-612