分子生物学方法在儿童流行性感冒监测中的应用

摘要：

目的建立一种能够快速、特异、有效地直接从临床标本中检测流行性感冒(流感)病毒并进行病毒型和亚型鉴别的方法,同时了解近年来北京地区A3型流感病毒血凝素重链(HA1)区基因的变异特点.方法根据编码A、B型流感病毒膜蛋白M基因的核苷酸序列设计两对引物,用于同一逆转录(RT)-PCR反应中(多重RT-PCR),根据A、B型毒株扩增产物的大小(分别为506 bp和261 bp)鉴别A、B型流感病毒.另根据编码A1和A3型流感病毒糖蛋白HA基因的核苷酸序列设计两对引物,与B型M基因引物用于同一RT-PCR反应中,可区分A1、A3或B型流感病毒(扩增产物分别为944 bp、1 072 bp和261 bp).为提高检测临床标本的敏感性,针对A1和A3型病毒HA基因和B型病毒M基因又设计了3对引物作为外侧引物,进行巢式-PCR反应.根据第二次PCR的扩增产物在1.2%的琼脂糖凝胶电泳中的大小即可确定型别.经PCR扩增1996～2002年间分离的北京地区A3型流感病毒株HA1区基因,测序并进行序列分析.结果用上述多重RT-PCR鉴定流感病毒分离株156株,与血凝抑制试验阳性符合率为100%.用多重巢式-PCR检测92份已经病毒分离确定为流感的儿科临床呼吸道标本,与病毒分离和血凝抑制试验阳性符合率分别为76.9%(A1型)、57.1%(A3型)、86.5%(B型).对5株1996～2002年间A3型分离株HA1区基因序列分析结果显示,不同年份的分离株HA1区基因具有较高的核苷酸和氨基酸同源性,而且年份越近的毒株之间同源性越高.结论多重RT-PCR和巢式-PCR可同时检测不同型别的流感病毒,并可直接对临床标本进行检测,为流感监测提供更加快速的新方法.北京地区A3型流感病毒分离株HA1区基因持续不断地发生点突变,糖基化位点不断增多,可能是导致其抗原漂移的原因.

关键词：流感病毒、多重逆转录-聚合酶链反应、巢式-聚合酶链反应、序列分析

所属期刊栏目：24

分类号：R511(传染病)

资助基金：北京市卫生局科研项目;北京市自然科学基金;北京市基因诊断基础性研究实验室基金JS96004

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：9-14