CD44过表达慢病毒载体的构建及其在前列腺癌LNCaP细胞中的表达

摘要：

目的 构建CD44基因过表达慢病毒载体并建立稳定过表达CD44的雄激素依赖前列腺癌LNCaP细胞株. 方法 聚合酶链反应(PCR)法获得CD44基因序列,与经NotI和NsiI双酶切的LV5载体连接获得CD44过表达重组慢病毒载体,重组质粒经双酶切鉴定和测序验证无误后,进行高纯度抽提,共转染293 T细胞,收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,对其浓缩后得到高滴度的慢病毒浓缩液,倍比稀释法检测病毒滴度.用病毒颗粒感染LNCaP细胞,荧光显微镜检测CD44荧光水平,定量反转录聚合酶链反应(QRT-PCR)检测CD44基因的表达,免疫印迹检测CD44蛋白的表达. 结果 成功构建CD44基因过表达慢病毒载体,并在293 T细胞中包装获得病毒.重组病毒感染LNCaP细胞后,荧光显微镜检测CD44基因过表达细胞荧光水平增加;QRT-PCR和免疫印迹检测显示,CD44在INCaP细胞中表达显著升高(均P＜0.05). 结论 成功构建CD44基因过表达慢病毒载体,并建立CD44过表达LNCaP细胞株.

关键词：前列腺肿瘤、抗原、CD44

所属期刊栏目：36

分类号：S85;R37

资助基金：国家自然科学基金81460387;广西卫生和计划生育委员会自筹基金Z2016586National Natural Science Foundation of China81460387;Foundation of Guangxi Zhuang Anomomous Region Health and Family Planning CommissionZ2016586

在线出版日期：2017-10-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1015-1018