利用CRISPR/Cas9技术建立基因外显子敲除小鼠模型

摘要：

目的 利用CRISPR/Cas9系统建立钙结合蛋白S100a9基因外显子定向敲除小鼠.方法 在S100a9基因第1个外显子5 ”端及第2个外显子3 ”端设计gRNA靶点,体外转录获得gRNA,利用Cas9蛋白体外检测gRNA切割效率.选取效率高的gRNA和Cas9 mRNA注射C57BL/6小鼠受精卵,进行胚胎移植,利用PCR和测序方法检测F0代小鼠S100a9基因外显子敲除情况. 结果 F0代出生9只小鼠,PCR鉴定其中4只具有长片段删除,效率为44.4％;测序鉴定3只小鼠完全敲除了第1和第2外显子,1只敲除了第2外显子. 结论 成功建立利用CRISPR/Cas9系统定向敲除基因外显子的方法,获得了S100a9基因第1和第2外显子敲除的小鼠.

关键词：小鼠,基因敲除、外显子

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资助基金：国家自然科学基金81300120;北京市自然科学基金7142030;北京市科技新星计划Z151100000315067National Natural Science Foundation of China81300120;Beijing Natural Science Foundation7142030;Beijing Nova ProgramZ151100000315067

在线出版日期：2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：768-772