依达拉奉对神经元缺氧复氧损伤的保护机制研究

摘要：

目的 探讨依达拉奉减轻缺氧复氧引起的细胞毒性损伤及保护神经元细胞的分子作用机制. 方法 建立缺氧缺糖复氧(OGD-R)神经元损伤模型,分空白对照组、OGD-R组、OGD-R加不同浓度依达拉奉组,检测不同时段乳酸脱氢酶(LDH)释放量、Caspase-3活性、Hoechst33258染色(计算核固缩比例),并进行比较选择适当浓度的依达拉奉及依达拉奉并特异性丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)阻断剂LY294002和MK2206对细胞分别进行预处理后再行OGD-R处理,用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测细胞外信号调节激酶(ERK)、AKT及Bcl-2蛋白表达,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测脑源性神经生长因子(BDNF)、Bcl-2 mRNA表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BDNF蛋白表达.分析比较相应数据探讨依达拉奉在OGD-R模型中可能的保护机制. 结果 依达拉奉预处理培养细胞减轻了缺氧复氧诱导的神经元损伤程度,LDH释放减少、Caspase-3活性和核固缩比例下降,且具有剂量依赖性;依达拉奉预处理后OGD-R,磷酸化ERK的表达量没有明显变化,而磷酸化AKT的表达量明显增加(P＜0.01).依达拉奉预处理可明显降低OGD-R处理细胞中LDH释放和核固缩比例(P＜0.01),但该过程可被MK2206抑制;与OGD-R组比较,依达拉奉预处理显著上调了BDNF和Bcl-2 mRNA的表达,且在OGD-R 8 h时尤其明显;ELISIA检测提示依达拉奉在同一时间点使BDNF蛋白表达增多;Western blot则显示依达拉奉上调了Bcl-2蛋白表达,这种作用可被MK2206抑制. 结论 依达拉奉通过上调BDNF和Bcl-2的表达、抑制Caspase-3活性减轻缺氧复氧引起的神经元毒性损伤,磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/AKT通路的激活可能是上述作用实现的重要途径之一.

关键词：依达拉奉、缺氧缺血,脑、信号传导、细胞凋亡

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资助基金：湖南省卫生厅科技计划项目B2013-054

在线出版日期：2015-11-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1126-1130