降钙素相关肽对骨髓间充质干细胞生物学特征影响的实验研究

摘要：

目的 观察携带降钙素基因相关肽(CGRP)的慢病毒对细胞生存和分化的影响. 方法 培养大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),携带CGRP的慢病毒载体转染MSCs(MSCsCGRP++组),空病毒载体转染MSCs作为对照组;应用流式细胞仪检测病毒转染率,酶联免疫吸附(ELISA)法测定CGRP蛋白表达,应用流式细胞仪及细胞免疫组化检测细胞表面标记物,胎盘蓝染色观察细胞存活能力,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况. 结果 携带CGRP的慢病毒转染MSCs后1d,荧光显微镜未观察到细胞有荧光,但ELISA测定MSCsCGRP+ +组有少量CGRP表达,随着转染时间延长,细胞逐渐出现荧光,慢病毒转染MSCs后3d和4d,镜下可见强荧光表达,细胞转染率分别为(77.87％和79.58％),ELISA检测MSCsCGRP++组CGRP表达量较对照组[(19.53±0.50) pg/ml和(3.12±0.001) pg/ml]增加(t=48.964,P＜0.01).慢病毒转染MSCs后3d,流式细胞仪检测MSCs仍高表达CD29和CD90,CD31的表达为24.75％,细胞转染后7d,CD31的表达为20.72％,与对照组6.63％比较CD31表达增加,vWF表达也随着转染时间延长表达逐渐增加;细胞转染后3d,MSCsCGRP+/+组及对照组均未见α-SMA表达,细胞转染14 d,在MSCsCGRP++组α SMA染色仍阴性,对照组胞浆见α-SMA阳性表达;细胞转染后3d和7d,MTT及台盼蓝染色结果显示两组间细胞活力及存活情况均无差异性(3d细胞活力t=-0.253,3d细胞存活率t=-0.307,7d细胞活力t=0.290,7d细胞存活率t=-0.690,均P＞0.05),β半乳糖苷酶检测细胞衰老程度在两组间差异也无统计学意义(3 d t=0.167,7 dt=0.141,均P＞0.05),随着转染时间延长,细胞转染14d,MSCsCGRP++组衰老程度较对照组降低(t=2.446,P＜0.05). 结论 转染慢病毒后细胞生物活性无明显影响,细胞仍具有增殖分化能力,细胞转染分泌的CGRP能促进细胞向内皮分化,抑制细胞向平滑肌细胞分化,这为基因工程细胞疗法治疗血管增殖性疾病提供新的思路和理论及实验依据.

关键词：间质干细胞、降钙素基因相关肽、转染、细胞学技术

所属期刊栏目：34

分类号：R733.7;R2;R329.28

资助基金：国家自然科学基金;贵州省国际科技合作项目

在线出版日期：2015-07-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：671-675