帕金森病致病基因Parkin与突触相关蛋白synaptojanin1的相互作用研究

摘要：

目的 探讨帕金森病致病基因Parkin与突触相关蛋白synaptojanin1(SYJ-1)的关系.方法 选择雄性8周龄野生型C57B/L小鼠5只,获取脑组织裂解物,分为阳性对照组、抗Parkin抗体组、抗SYJ-1抗体组和阴性对照组,阳性对照组不加任何抗体,后3组分别加入抗Parkin抗体、抗SYJ-1抗体、无效抗体处理,检测Parkin和SYJ-145表达.选择人胚肾细胞系(HEK-293T)细胞进行结构域鉴定实验,用免疫沉淀反应检测Parkin与SYJ-1共沉淀.检测构建Parkin不同结构域截短突变质粒.Pakrin对SYJ-1泛素化降解实验中,将HEK-293T细胞分为6组(n=5)转染:绿色荧光蛋白(GFP)-SYJ-145+ HA-UB质粒组(A组)、GFP-SYJ-145+ Flag-Parkin组(B组)、GFP-SYJ-145+ HA-UB+ Flag-Parkin质粒组(C组)、MG132处理的GFP-SYJ-145+HA UB+ MG132质粒组(D组)、GFP-SYJ-145+ Flag-Parkin+ MG132质粒组(E组)和GFP-SYJ-145+HA-UB+ Flag-Parkin+ MG132质粒组(F组),检查GFP-SYJ145表达.结果 阳性对照组有Parkin和SYJ-145表达,抗Parkin抗体组有SYJ-145表达,抗SYJ-1抗体组有Parkin表达,而阴性对照组无Parkin和SYJ-145表达.转染293T细胞能够表达构建的6种截短突变质粒Ubl,LINK,R0,R1,IBR,R2.免疫沉淀反应发现,IBR和R2结构域的缺失抑制Parkin与SYJ 1的共沉淀.C组GFP SYJ-145表达明显低于A组、B组、D组、E组、F组(0.23±0.01 vs 0.52±0.01,0.55±0.02,0.62±0.01,0.60±0.01,0.48±0.01,P＜0.01).结论 SYJ-1为Parkin蛋白E3连接酶的一个新的底物,Parkin特异性的通过IBR和R2结构域直接结合SYJ-1,Parkin通过蛋白酶体途径促进SYJ-1降解.

关键词：帕金森病、突触蛋白类、质粒、突触囊泡蛋白、转染

所属期刊栏目：22

在线出版日期：2020-09-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：979-982