10.11915/j.issn.1671-5403.2022.05.077
血管内皮功能调节酶pCDH-Myc-UBR5分子克隆的构建
目的 构建pCDH-Myc-UBR5重组质粒,并探究泛素蛋白连接酶E3组分N-识别蛋白5(UBR5)在调控血管生成方面的生物学功能.方法 以人乳腺癌细胞(MCF7)的互补DNA(cDNA)为模板,将UBR5基因编码区序列分为前后两段,经聚合酶链式反应(PCR)扩增.两段扩增序列插入到真核表达载体pCDH-Myc中,通过菌液PCR及DNA测序鉴定插入片段.将重组质粒瞬时转染至人胚胎肾细胞(HEK293T)中,通过蛋白质印迹法检测Myc-UBR5蛋白的表达.为了验证UBR5蛋白的功能,通过免疫共沉淀实验检测UBR5与先天性角化不良1(DKC1)蛋白的相互作用.结果 成功构建pCDH-Myc-UBR5重组质粒.经菌液PCR及DNA测序证实UBR5扩增序列成功插入到pCDH-Myc载体中,并在HEK293T中表达.免疫共沉淀实验发现UBR5与DKC1存在相互作用.结论 通过分子克隆技术可成功构建pCDH-Myc-UBR5质粒并在细胞中正确表达.UBR5与血管生成调控蛋白DKC1存在相互作用.
泛素蛋白连接酶E3组分N-识别蛋白5、重组质粒、分子克隆、先天性角化不良1蛋白、血管生成
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R34(人体生物化学、分子生物学)
国家自然科学基金;北京市科技新星计划
2022-06-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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