组蛋白去乙酰化酶6介导蛋白包涵体-自噬-溶酶体途径在百草枯诱导多巴胺能神经元自噬障碍中的作用

摘要：

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶6（HDAC6）介导蛋白包涵体-自噬-溶酶体途径（AALP）在百草枯（PQ）诱导多巴胺能神经元自噬障碍中的作用。方法:以人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）作为多巴胺能神经元的体外模型，将细胞分为对照组和PQ染毒组（不同浓度PQ处理）。用不同浓度PQ （0、25、50、100、200和400 μmol/L）处理细胞24 h，100 μmol/L PQ处理细胞不同时间（0、12、24、36、48、60和72 h），CCK-8法检测细胞增殖活性；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞HDAC6、α-突触核蛋白（α-syn）、动力蛋白中链（Dynein IC1/2）、微管相关蛋白轻链3（LC3）、自噬相关蛋白（Beclin1）、泛素结合蛋白（p62）和溶酶体相关膜蛋白-1（Lamp-1）的表达水平；免疫荧光双标法观察细胞HDAC6、α-syn、Dynein IC1/2、LC3、Lamp-1及γ-微管蛋白（γ-tubulin）在细胞中的表达及定位。结果:PQ呈剂量和时间依赖性抑制SH-SY5Y细胞增殖活性（
R=-0.950、-0.960，
P<0.05）；与对照组比较，PQ染毒组HDAC6、α-syn、p62蛋白表达水平升高，差异有统计学意义（
P<0.05），而自噬标志蛋白（LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ）、Dynein IC1/2、Beclin1、Lamp-1表达水平降低（
P<0.05）；与对照组比较，PQ染毒组HDAC6与α-syn荧光信号增强，蛋白表达水平增高，而Dynein IC1/2、LC3、Lamp-1荧光信号减少，蛋白表达水平降低（
P<0.05）；PQ染毒诱导上述蛋白表达位置也发生变化，细胞质中的HDAC6由弥散状逐渐向细胞核聚集；α-syn、Dynein IC1/2、γ-tubulin、LC3、Lamp-1也逐渐由细胞质向细胞核聚集，并与HDAC6在细胞核共定位于核周区域。
结论:PQ可能通过诱导HDAC6介导蛋白包涵体-自噬-溶酶体途径障碍引起α-syn异常聚集。

关键词：百草枯、自噬、组蛋白去乙酰化酶6、蛋白包涵体自噬-溶酶体途径

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资助基金：宁夏自然科学基金重点项目2020AAC02018;National Natural Science Foundation of Ningxia2020AAC02018

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：241-247