磷脂酰肌醇-3激酶在石英诱导的DNA双链断裂修复中的作用

摘要：

目的 探讨磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)在石英致人胚肺成纤维细胞(HELF)DNA双链断裂修复中的作用.方法 用200μg/ml的石英刺激HELF和用显性失活突变体抑制P13K功能的HELF(DN-Δp85)不同时间.免疫印迹法检测磷酸化H2AX(γH2AX)的水平以及DNA依赖性蛋白激酶(DNA-dependent protein kinase,DNA-PK)的组成成分Ku70、Ku8和DNA-PKcs的蛋白水平,并用Image-Pro plus 6.0软件对条带光强度进行半定量分析.中性彗星试验检测DNA双链断裂损伤,用彗尾DNA百分含量值观察DNA双链断裂损伤程度变化,并计算DNA修复能力.结果 γH2AX的水平在石英刺激3 h明显增高,12 h达峰值,24 h下降.与HELF相比,石英诱导的DN-Δp85细胞γH2AX水平增高受到抑制.石英刺激HELF和DN-ΔP85细胞12 h组Ku70、Ku80和DNA-PKcs的蛋白水平(0.58±0.09、0.95±0.21、0.55±0.06,0.37±0.14、0.55±0.17、0.52±0.07)均高于相应的无石英刺激组(0.26±0.10、0.69±0.26、0.43±0.11,0.11±0.07、0.27±0.14、0.39±0.07),差异有统计学意义(P<0.05).与石英刺激HELF 12 h组比较,石英刺激DN-ΔP85 12 h组的Ku70、Ku80蛋白水平增高受到抑制,差异均有统计学意义(P<0.05).石英刺激的HELF12 h组和DN-Δp85 12h组的彗尾DNA百分含量分别为9.78±1.15和11.79±4.90,明显高于同细胞系的无石英刺激组(2.40±0.69,3.31±1.35),差异有统计学意义(P<0.05);与石英刺激HELF 12 h组相比,石英刺激HELF细胞24 h组彗尾DNA百分含量明显降低(4.19±0.47),差异有统计学意义(P<0.05).石英刺激DN-Δp85 24 h组的彗尾DNA百分含量为(7.58±4.32),明显高于无石英刺激DN-Δp85组和石英刺激HELF 24 h组,差异有统计学意义(P<0.05).HELF的DNA修复能力为75.74%,DN-Δp85的DNA修复能力为49.64%.结论 石英可诱导DNA双链断裂损伤,PI3K与DNA损伤修复有关,通过调节Ku70和Ku80的水平,可促进石英诱导的DNA双链断裂损伤的修复.

关键词：石英、DNA连接酶类、DNA损伤、彗星试验、DNA修复

所属期刊栏目：28

分类号：R9(药学)

资助基金：国家自然科学基金3067147

在线出版日期：2010-06-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：241-245