pEGFP-C3/SUMF2重组真核表达载体的构建及在人支气管上皮细胞中的表达

摘要：

目的 构建与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)融合的人硫酸酯酶修饰因子2(SUMF2)真核表达载体.方法 用RT-PCR技术从人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBEC)获得SUMF2的cDNA模板,PCR方法扩增人SUMF2基因.用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切扩增人SUMF2基因及质粒pEGFP-C3;将2种酶切产物按常规方法连接、转化大肠杆菌Top10;挑取菌落培养,提取质粒,酶切鉴定,测序;将测序正确的重组载体用脂质体法转染HBEC,荧光倒置显微镜观察.提取转染细胞的总蛋白进行Western blot检测.结果 扩增出1条约857bp的片段,与预期的SUMF2大小相符.酶切结果显示重组质粒pEGFP-C3/SUMF2被切成2条片段,其中1条为pEGFP-C3载体,另1条为目的 片段.经测序鉴定,序列与GenBank(NM_ 015411.2)中的序列高度同源.荧光倒置显微镜观察显示,人SUMF2基因主要在内质网表达.Western blot结果显示在相对分子质量为37×103处有一蛋白条带,与预期大小相符.结论 成功构建重组表达载体pEGFP-C3/SUMF2,为进一步研究SUMF2对IL-13的作用奠定了实验基础.

关键词：硫酸酯酶修饰因子2、真核表达载体、人支气管上皮细胞

所属期刊栏目：6

分类号：R392.11;R562.25

资助基金：国家自然科学基金资助项目81171657

在线出版日期：2012-10-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：168-172