阻断PD-1/PD-L1信号通路对负载HBsAg的树突细胞抗HBV免疫功能的影响

摘要：

目的 探讨阻断PD-1/PD-L1信号通路后,负载HBsAg的树突细胞(dendritic cells,DC)诱导HBV转基因小鼠免疫应答的作用特点.方法 体外诱导扩增BALB/c小鼠骨髓来源的DC,尾静脉免疫HBV转基因小鼠(其中在DC免疫前1 d腹腔注射PD-L1抗体,共3次).实验分5组进行:DC/HBsAg+PD-L1抗体组、DC/HBsAg组、Dc组、mlgG组和磷酸盐缓冲液(PBS)组,分别以流式细胞术、乳酸脱氢酶(LDH)释放法、酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量聚合酶链反应(PCR)等检测HBV转基因小鼠脾脏淋巴细胞增殖及细胞内干扰素γ(IFNγ)、特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性及血清HBsAg、HBV DNA和丙氨酸转氨酶(ALT)水平.采用SPSS 13.0统计软件进行分析,组间比较采用ANOVA方差分析和q检验.结果免疫后第3天和第6天,DC/HBsAg+PD-L1抗体组与其他各组比较在诱导CD_3~+CD_8~+T淋巴细胞增殖及IFNγ分泌方面差异有统计学意义(细胞增殖:F值分别为25.22和39.01,P值均<0.01;IFNγ分泌:F值分别为32.35和36.98,P值均<0.01);而DC/HBsAg组与Dc组淋巴细胞增殖能力比较仅在第3天有统计学意义(t=6.79,P=0.012).特异性CTL的活性在DC/HBsAg+PD-L1抗体组明显升高.各组血清HBsAg在第6天差异有统计学意义(F=6.12,P<0.05).DC/HBsAg+PD-L1抗体组血清ALT水平与DC/HBsAg组比较在第3天无差异,与其他各组比较在第3和第6天差异有统计学意义(F值分别为19.22和14.30,P值均<0.05).各组对HBV DNA的清除能力没有差别,但DC/HBsAg+PD-L1抗体组有1只小鼠病毒载量下降1个数量级.结论封闭PD-1/PD-L1信号通路能通过提高特异性CD_3~+CD_8~+T淋巴细胞增殖及其分泌IFNγ能力,进而促进负载HBsAg的DC诱导转基因小鼠抗HBV免疫能力.

关键词：树突细胞、小鼠、转基因、信号通路、程序性死亡-1/程序性死亡配体-1、T淋巴细胞、干扰素γ

所属期刊栏目：3

分类号：R734.2;R512.62;R285.5

资助基金：江苏省卫生厅科研项目;博士启动基金

在线出版日期：2010-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：35-39