变异链球菌绿色荧光蛋白报告株在双菌种生物膜研究的应用

摘要：

目的 探讨变异链球菌(S.mutans)绿色荧光蛋白(GFP)报告株在单、双菌种生物膜的形成、代谢和抗药性研究的应用.方法 采用基因重组技术构建S.mutans GFP报告株C67-1 pDM15和UA159 pDM15;通过荧光显微镜和荧光光度计,评估报告株转化效率、生长能力和荧光表达规律;构建S.mutans GFP报告株与戈登链球菌(S.gordonii)的单、双菌种生物膜,比较单、双菌种生物膜中S.mutans的生物膜形态、糖代谢活力及氯已定(CHX)作用下的抗药性差异.数据运用单因素方差分析、Pearson相关性分析与独立样本t检验进行统计学分析.结果 S.mutans GFP报告株可稳定地表达gfp基因,生长能力和生物膜形成能力与野生株相似;生物膜加入0.2％的葡萄糖后荧光量迅速增加,可检测细菌代谢改变,4 h的相对荧光增长值(ΔRLU)可反映生物膜量,二者显著相关(r=0.9818～0.9985,P<0.001);S.gordonii改变S.mutans C67-1和UA159的生物膜结构,抑制UA159菌株生物膜的形成;剩余荧光增长率[ΔRLU(％)]反映耐药能力,单菌种生物膜C67-1和UA159的ΔRLU(％)相似,分别为(70.2±8.0)％和(72.3±7.9)％(t=-0.521,P=0.630),在双菌种生物膜中S.mutans的ΔRLU(％)发生改变,与各自单菌种生物膜相比差异有统计学意义:C67-1升高至(85.6±4.3)％(t=-2.872,P=0.045),UA159降低至(41.2±10.1)％(t=3.551,P=0.024).结论 S.gordonii对S.mutans生物膜形成能力和抗药性的改变具有亚型差异.GFP报告株可作为多菌种生物膜定量与空间结构研究的模式菌.

关键词：变异链球菌、戈登链球菌、绿色荧光蛋白报告株、双菌种生物膜、抗药性

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资助基金：国家自然科学基金11772361、81400505

在线出版日期：2019-07-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：136-143