小鼠脂肪干细胞来源外泌体对低氧诱导骨细胞凋亡的影响

摘要：

目的 研究小鼠脂肪干细胞(ASC)释放的外泌体对低氧缺血情况下骨细胞凋亡的影响.方法 分离、培养原代小鼠ASC,流式细胞术鉴定细胞表面标记,成骨和成脂向诱导分化鉴定细胞多向分化潜能;提取ASC释放的外泌体,透射电镜检测外泌体形态特征,检测外泌体标志蛋白CD9和热休克蛋白70(HSP70)的表达;低氧缺血培养骨细胞样细胞系MLO-Y4细胞,构建骨细胞凋亡模型,ASC释放的外泌体处理MLO-Y4细胞,TUNEL检测细胞凋亡情况.应用SPSS 20.0软件、Bonferroni检验进行统计学分析.结果 实验中提取的ASC符合间充质干细胞鉴定标准:流式细胞术结果 显示ASC细胞表面标志CD31、CD45阳性率小于2%,CD44阳性率大于95%;ASC成骨诱导21 d后可见钙化结节形成,成脂诱导21 d后可见细胞内串珠样脂滴形成.透射电镜观察ASC释放的外泌体可见圆形、直径约为30~130 nm、具有双层膜结构的囊泡;检测到外泌体表达标志性蛋白CD9和HSP70.低氧缺血处理MLO-Y4骨细胞24 h后可见细胞凋亡率显著增加(常氧血清组0.041±0.018、常氧无血清组0.236±0.539、低氧血清组0.058±0.015、低氧无血清组0.326±0.108),对低氧无血清培养的骨细胞中加入0.5μg/ml小鼠ASC来源外泌体能够显著抑制骨细胞凋亡,低氧外泌体组细胞凋亡率为0.111±0.049,差异具有统计学意义(P<0.001).结论 ASC释放的外泌体可以抑制低氧缺血环境下骨细胞细胞凋亡,提示ASC释放的外泌体可以促进骨组织修复与再生.

关键词：脂肪干细胞、外泌体、骨细胞、细胞凋亡、细胞低氧

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分类号：R68;R31

资助基金：国家自然科学基金81570955;广东省科技计划2013B051000032、2014A020212072;广州市科技计划201510010222

在线出版日期：2017-07-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：157-163