10.3877/cma.j.issn.1674-1366.2015.02.004
微小RNA-221/222海绵体载体的构建及验证
目的:构建微小RNA(miR)-221/222海绵体载体并初步探讨其在口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞中的作用。方法利用miRNA海绵体技术设计合成含3个has-miR-221和3个has-miR-222反义序列的DNA片段,经酶切连入pDC316-mCMV-EGFP质粒载体,合成miR-221/222海绵体载体。将miR-221/222海绵体载体转染入OSCC细胞系UM1,检测转染效率,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-221和miR-222表达水平,Western blot检测转染后PTEN蛋白表达水平,Transwell实验检测细胞的侵袭能力。结果成功构建miR-221/222海绵体载体,测序验证与设计序列完全一致;UM1各组细胞转染效率均在70%以上;实时荧光定量PCR显示,miR-221/222海绵体载体组miR-221和miR-222表达水平较pDC316质粒组和UM1细胞组明显降低(t1=111.69,P1=0.001;t2=6.98,P2=0.002;t3=236.55,P3=0.001;t4=22.06,P4=0.001);Western blot显示,海绵体转染组较对照组PTEN蛋白水平表达明显升高;Transwell实验显示,海绵体转染组细胞侵袭能力较对照组减弱。结论实验成功构建了miR-221/222海绵体载体,并初步验证其对OSCC细胞侵袭性的抑制作用,为后续miR-221/222的功能研究奠定基础。
微小RNA、海绵体载体、第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因、癌、鳞状细胞
国家自然科学基金81272554、81472526;广东省自然科学基金9151008901000187、S2011020003247;广东省科技计划国际合作项目2011B050400030、2012B031800387
2015-05-25(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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