细胞分裂周期蛋白42对牙根发育的影响及相关机制研究

摘要：

目的:探究细胞分裂周期蛋白42（cell division cycle 42，CDC42）对牙根发育的影响及其对上皮根鞘（Hertwig root sheath，HERS）细胞增殖与迁移的调控作用。方法:采用免疫荧光追踪CDC42在小鼠出生后5 d（postnatal day 5，P5；P3、P7、P14含义依此类推）、P7、P14磨牙牙根的表达情况。将9只8周龄C57BL/6J雄鼠按简单随机抽样法分为3组（每组3只），取P3 C57BL/6J乳鼠牙胚于气-液环境下培养1 d后植入小鼠肾被膜下观察牙根发育情况。对照组在小鼠肾被膜下仅植入牙胚，磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）组植入牙胚及吸附PBS的凝胶珠，ML141组植入牙胚及吸附CDC42抑制剂ML141的凝胶珠。通过慢病毒转染敲低HERS细胞中Cdc42表达，进行细胞计数试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）检测、胸腺嘧啶核苷类似物（5-ethynyl-2′-deoxyuridine，EdU）检测以及划痕实验。对迁移的细胞进行高尔基体（GM130）和细胞骨架（F-actin）免疫荧光染色。通过CCK-8和EdU检测比较对照组和敲低组的细胞增殖活性，通过划痕实验比较对照组和敲低组的细胞迁移率。结果:CDC42在牙根发育中表达于HERS上皮、高度极化的成釉上皮和成牙本质细胞，以及临近的牙乳头和牙囊细胞中。肾被膜移植结果显示，ML141组牙根长度［（0.61±0.09）mm］显著短于对照组［（1.03±0.19）mm］（
P=0.007）和PBS组［（0.98±0.10）mm］（
P=0.021）。慢病毒转染后，敲低组Cdc42相对表达量（0.31±0.33）显著低于对照组（1.05±0.08）（
t=15.38，
P<0.001），敲低效率接近70%。转染后3、4、5 d，敲低组细胞活性（分别为0.87±0.04、0.96±0.10、0.59±0.06）均显著低于对照组（分别为1.09±0.13、1.55±0.32、1.10±0.09）（
t=3.16，
P=0.016；
t=4.23，
P=0.002；
t=5.08，
P<0.01），敲低组细胞增殖率［（1.65±0.64）%］显著低于对照组［（4.02±1.12）%］（
t=5.21，
P<0.001）。Cdc42敲低后，敲低组24和48 h细胞迁移率［分别为（45.1±4.2）%、（56.4±8.3）%］均显著低于对照组［分别为（63.8±7.4）%、（80.2±7.8）%］（
t=3.78，
P=0.019；
t=3.62，
P=0.023）。对照组中迁移细胞中高尔基体沿迁移方向定向分布，而在敲低组中高尔基体沿细胞核周围分布。
结论:CDC42在牙根发育中对牙根长度调节具有重要作用，其可能通过影响HERS细胞的迁移与增殖介导牙根伸长。

关键词：细胞周期蛋白质类、牙根发育、上皮根鞘、细胞分裂周期蛋白42、细胞增殖、细胞迁移分析

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在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：230-237