高脂环境下微RNA-29c-3p靶向调节蓬乱蛋白2对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

摘要：

目的 研究高脂与正常环境下大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)成骨分化过程中4种微RNA对蓬乱蛋白2的靶向调节作用及其对BMSC成骨分化的影响.方法 分别用普通(对照组)和高脂(高脂组)成骨诱导液培养BMSC,第3、5、7、14、21天实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR,qPCR)分析4种微RNA (micro RNA,miR) (miR-21-5p、miR-29c-3p、miR-138-5p及miR-351-5p)、蓬乱蛋白2、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Runt相关基因2(Runt-related transcription gene 2,Runx2)mRNA相对表达量,蛋白质印迹法分析蛋白表达;BMSC分别转染微RNA模拟物、抑制物和相应阴性对照(分别为模拟物组、抑制物组和相应阴性对照组),高脂成骨诱导后检测第1、3、5、7天ALP活性;第7天行ALP染色,蛋白质印迹法分析蓬乱蛋白2、ALP、Runx2的蛋白表达,qPCR分析蓬乱蛋白2 mRNA表达.构建蓬乱蛋白2野生型和突变型双荧光酶报告质粒,每种质粒分别与4种微RNA模拟物或相应阴性对照共转染293T细胞,检测荧光素酶活性.结果 成骨诱导各时间点高脂组BMSC的miR-21-5p、miR-29c-3p、miR-138-5p及miR-351-5p相对表达量均较对照组高,第21天分别高20％、60％、340％、4420％ (P＜0.05).转染miR-21-5p、miR-29c-3p模拟物后BMSC蓬乱蛋白2、ALP、Runx2蛋白表达均降低;其中miR-29c-3p模拟物组蓬乱蛋白2比相应阴性对照组下降35％(P＜0.05),miR-29c-3p抑制物组蓬乱蛋白2比相应阴性对照组上调269％ (P＜0.05).共转染野生型质粒与miR-29c-3p模拟物后,293T细胞荧光素酶活性受到抑制,较相应阴性对照组下降60％(P＜0.05).结论 高脂环境下BMSC成骨分化受到抑制,miR-21-5p、miR-29c-3p、miR-138-5p及miR-351-5p可能参与BMSC成骨分化调控;miR-29c-3p通过靶向调控蓬乱蛋白2表达而发挥抑制BMSC成骨分化的作用.

关键词：微RNAs、骨髓、间质干细胞、蓬乱蛋白2

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在线出版日期：2018-11-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：694-700