肿瘤坏死因子受体相关因子6基因沉默对成牙本质细胞增殖能力的影响

摘要：

目的 研究小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)抑制肿瘤坏死因子受体相关因子6 (tumor necrosis factor receptor associated factor 6,TRAF6)的表达后,对小鼠成牙本质细胞样细胞MDPC-23增殖能力的影响,以期构建TRAF6基因沉默的成牙本质细胞模型,并阐明TRAF6对成牙本质细胞增殖的调控作用.方法 将针对TRAF6基因的siRNA真核表达载体pSUPER-TRAF6siRNA转染MDPC-23(转染组),空载体对照组采用pSUPER空载体质粒,空白对照组MDPC-23细胞不转染任何质粒,采用氨基糖苷类抗生素G418抗性筛选,挑选克隆株;反转录PCR (reverse transcription-PCR,RT-PCR)和蛋白质印迹法检测TRAF6的mRNA和蛋白表达;通过绘制细胞生长曲线、甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTr)、流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测转染前后细胞增殖能力的变化.结果 MDPC-23细胞转染pSUPER-TRAF6siRNA后,可以稳定表达克隆株,其TRAF6mRNA和蛋白表达水平与两个对照组相比均显著下降[mRNA:转染组为0.163±0.008,空载体对照组为0.778±0.017,空白对照组为0.782±0.004,P＜0.000 1;蛋白质印迹法:转染组为0.215±0.006,空载体对照组为0.964±0.007,空白对照组为0.973±0.013,P＜0.001];稳定转染TRAF6siRNA的单克隆株3、5d时,转染组A值为0.46±0.03和1.35±0.06,均显著高于相同时间点的空载体对照组和空白对照组(P＜0.01);转染组的细胞增殖指数(proliferation index,PrI)[(24.1±2.2)％]均显著高于空载体对照组[(11.2±1.0)％]和空白对照组[(10.5±0.7)％](P＜0.01).结论 稳定转染pSUPER-TRAF6siRNA后可以显著降低MDPC-23细胞中TRAF6的表达,表明构建TRAF6基因沉默的成牙本质细胞模型成功;TRAF6基因沉默可以使MDPC-23细胞的增殖能力增强,将影响成牙本质细胞形成和修复牙本质的能力,表明TRAF6是调控牙本质发育及损伤修复过程的重要信号分子.

关键词：RNA干扰、转染、细胞增殖、肿瘤坏死因子受体相关因子6

所属期刊栏目：49

分类号：Q785;S965;R780.2

资助基金：山西省科技攻关计划20090311057-6

在线出版日期：2014-08-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：428-433