促凋亡蛋白Bim、Bax和Bak在牙龈蛋白酶诱导成骨细胞凋亡中的表达

摘要：

目的 建立牙龈蛋白酶诱导成骨细胞凋亡模型,检测成骨细胞凋亡过程中与Bcl-2蛋白相互作用的细胞死亡调解子(Bcl-2 interacting mediator,Bim)、Bcl-2蛋白相关X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)和Bcl-2蛋白拮抗剂(Bcl-2 antagonist/killer,Bak)的表达,探寻保护成骨细胞的方法,为牙周炎的发病机制研究提供依据.方法 提取牙龈蛋白酶并测定其活性；将0.453、0.906、1.812 U/L牙龈蛋白酶分别与成骨细胞共培养0、16、24和48 h,4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色及膜联蛋白V-碘化丙啶双染色检测牙龈蛋白酶诱导成骨细胞(小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14)凋亡,建立牙龈蛋白酶诱导成骨细胞凋亡模型；1.812 U/L牙龈蛋白酶与成骨细胞共培养0、4、8、16、24和48 h,蛋白质印迹法确定成骨细胞凋亡过程中Bim、Bax、Bak的蛋白表达；胰蛋白酶抑制剂抑制1.812 U/L牙龈蛋白酶活性后与成骨细胞共培养24 h,蛋白质印迹法检测Bim蛋白表达与成骨细胞凋亡率的改变.结果 精氨酸-牙龈蛋白酶活性为(18.11±2.11) U/L,赖氨酸-牙龈蛋白酶活性为(1.02 ±0.25) U/L;DAPI染色显示1.812 U/L牙龈蛋白酶可诱导成骨细胞凋亡,16h凋亡率为(6.31±0.37)％,24 h达(11.20 ±0.35)％,48 h为(10.80±0.46)％；膜联蛋白V-碘化丙啶染色结果与DAPI染色结果基本一致.成骨细胞凋亡过程伴随促凋亡蛋白Bim的表达升高,4h时Bim相对蛋白表达量为(0.31 ±0.03),约为对照组(0.17 ±0.03)的2倍,24 h时Bim相对蛋白达峰值(0.57 ±0.05),为对照组的3～4倍；胰蛋白酶抑制剂可有效抑制牙龈蛋白酶活性,使Bim蛋白表达量由(0.58±0.04)降至(0.14±0.03)；同时DAPI染色显示胰蛋白酶抑制剂可逆转牙龈蛋白酶诱导的细胞凋亡,24 h成骨细胞凋亡率由(11.20±0.35)％降至(4.31±0.38)％.成骨细胞高表达Bax(相对蛋白表达量为0.85±0.05),在成骨细胞凋亡过程中,Bax的相对蛋白表达总量无明显改变；蛋白质印迹法未检测到成骨细胞表达Bak.结论 1.812 U/L牙龈蛋白酶可诱导成骨细胞凋亡,凋亡过程中伴随Bim表达升高,抑制牙龈蛋白酶活性可有效降低Bim的蛋白表达,提示促凋亡蛋白Bim参与牙龈蛋白酶诱导成骨细胞凋亡过程,抑制Bim的表达可使成骨细胞免于凋亡.

关键词：成骨细胞、细胞凋亡、胰蛋白酶抑制剂、牙龈蛋白酶

所属期刊栏目：48

分类号：R737.9;R384.4;R965

资助基金：国家自然科学基金;教育部留学回国人员科研启动基金

在线出版日期：2013-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：272-277