变形链球菌UA159Pfs蛋白原核表达纯化及对自诱导分子2合成的影响

摘要：

目的 合成有活性的变形链球菌自诱导分子2(autoinducer-2,AI-2),探讨AI-2在牙面生物膜形成中的作用,以期为后续研究奠定基础.方法 构建表达载体pET21a(+)-pfs;诱导表达S-腺苷高半胱氨酸核苷酶(S-adenosylhomocysteine nucleosidase,Pfs)蛋白,蛋白质印迹法鉴定；镍柱纯化；Pfs与S-核糖基高半胱氨酸酶(S-ribosylhomocysteinase,LuxS)催化S-腺苷L高半胱氨酸”S-(5’-adenosyl)-L-homocysteine,SAH”合成AI-2,以哈氏弧菌BB170检测其生物活性,并观察Pfs蛋白浓度对AI-2合成的影响.结果 成功构建了表达载体pET21a(+)-pfs;1 mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导目的蛋白表达4h蛋白表达量最高,纯化得蛋白质量浓度为0.8 g/L;蛋白质印迹法证实表达产物为Pfs融合蛋白.合成了有生物活性的AI-2,其诱导哈氏弧菌BB170发光的强度在5h时最强”(815 522 ±73 912) cd”.Pfs质量浓度与AI-2相对活性呈浓度依赖关系(P＜0.05),且随着Pfs蛋白质量浓度的升高(0 ～0.38 g/L) AI-2的相对活性逐渐增大(0 ～ 29.14 ±1.35),二者呈正相关(r =0.819,P=0.000).结论 Pfs融合蛋白具备相应的生物功能,可在体外合成有活性的AI-2;线性相关分析表明Pfs蛋白浓度与合成的AI-2相对活性呈正相关.

关键词：链球菌,变异、Pfs、AI-2

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资助基金：西安市科技计划SF090242

在线出版日期：2013-01-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：68-73