殊异韦荣菌中乳酸脱氢酶重组蛋白的表达、纯化及活性分析

摘要：

目的 进一步测定殊异韦荣菌中依赖性乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的活性,以期为研究该酶的具体功能及作用机制奠定基础,并为龋病预防和治疗提供新的思路.方法 重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中,采用不同时间及6种不同浓度的异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyhhio-β-D-galactoside,IPTG)诱导乳酸脱氢酶蛋白表达,选择最佳条件诱导LDH蛋白表达.并经His-标记蛋白纯化柱(HisTRAP FF柱)提纯,用LDH活性试剂盒测定蛋白活性.结果 pET-28a-LDH转入BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示最适表达条件分别为IPTG终浓度0.4 mmol/L、30℃诱导8h,IPTG终浓度0.4 mmol/L、30 ℃诱导6h.经BandScan 5.0软件分析,pET-28a-LDH质粒转化BL21(DE3)表达相对含量为9.0％,高于Rosetta(DE3)的6.1％；LDH活性试剂盒测定的蛋白活性值为13.79.结论 本项研究获得了LDH蛋白的最适诱导条件,并测出殊异韦荣菌中依赖性LDH的活性,为进一步研究LDH的功能及在龋病防治中的作用奠定了基础.

关键词：韦荣球菌属、乳酸脱氢酶类、重组表达、蛋白纯化

所属期刊栏目：47

分类号：S858.28;R392.11;Q78

资助基金：吉林省自然科学基金2010152204

在线出版日期：2013-01-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：63-67