转染猿猴空泡病毒40大T抗原基因无限增殖化大鼠牙囊细胞的实验研究

摘要：

目的 以猿猴空泡病毒40大T抗原基因( simian virus 40 large tumor antigen,SV40Tag)转染SD大鼠牙囊细胞(rats' dental follicle cells,rDFC)构建无限增殖化rDFC,以期为牙周组织工程研究提供稳定的细胞来源.方法 分离SD大鼠下颌第一磨牙牙胚,组织块法分离培养原代rDFC,免疫组织化学技术鉴定细胞来源.利用脂质体介导含有SV40Tag的质粒pSSR69-pAmpho转染293细胞,取病毒上清液感染rDFC,潮霉素筛选,阳性克隆扩大培养(无限增殖化组)；以未转染细胞作对照组,观察细胞形态,计算细胞群体倍增时间,绘制细胞生长曲线和倍增曲线.反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测rDFC中SV40Tag基因的表达,蛋白质印迹法检测端粒酶表达,计算平板克隆形成率,行软琼脂克隆形成实验及细胞致瘤性实验.对无限增殖化组和对照组细胞群体倍增时间采用两独立样本t检验,对两组细胞平板克隆形成率采用两独立样本率x2检验.结果 无限增殖化rDFC形态与正常rDFC形态无明显差别.无限增殖化rDFC中SV40Tag RT-PCR结果显示在357 bp处有一条特异扩增条带,未转染细胞未见条带,无限增殖化rDFC端粒酶表达显著高于正常细胞.两组rDFC生长曲线无明显差异,倍增曲线显示无限增殖化组rDFC保持了较强的增殖能力.无限增殖化rDFC平板克隆形成率[34％( 33/96)]高于对照组[22％(21/96)],但差异无统计学意义(x2=3.71,P＞0.05),软琼脂内不能形成克隆；两组细胞致瘤性实验均未见肿瘤形成.结论 SV40Tag基因无限增殖化rDFC能在体外长期培养并多次传代,具有相对稳定的增殖特性和功能状态,为良性转化,有望进一步应用于牙周组织工程研究.

关键词：牙囊、猴病毒40、组织工程、大鼠、无限增殖化

所属期刊栏目：47

分类号：R78(口腔科学)

资助基金：国家自然科学基金30870754;重庆市第二批高等学校优秀人才支持计划渝教人201072

在线出版日期：2012-12-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：631-636