Skp2靶向RNA干扰质粒的构建及其对人舌鳞癌Tca8113细胞的影响

摘要：

目的 运用RNA干扰技术阻断人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞中Skp2基因的表达,观察Skp2基因沉默后对Tca8113细胞的影响.方法 采用真核转录质粒pRNAT-U6.1/Neo构建针对Skp2基因的重组转染质粒.经聚乙烯亚胺法将其转染Tca8113细胞,通过反转录聚合酶链反应(reverse transcrip-tase polymerase chain reaction,RT-PCR)、Western blot检测Skp2、p27表达的变化;流式细胞仪、甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl terrazolium,MTT)法检测转染后Tca8113细胞的细胞周期、生长速度的变化.结果 转染重组质粒Skp2shRNA-2、Skp2shRNA-3后,Tca8113细胞内Skp2基因在mRNA和蛋白水平上均下调表达(P＜0.01),p27基因蛋白水平上调表达(P＜0.01);而各重组质粒转染后p27基因的mRNA水平无明显变化.重组质粒Skp2shRNA-2、Skp2shRNA-3转染Tca8113细胞后,与对照组相比,G1～G0期细胞增加了约22%(P＜0.01),G2～M期和S期细胞减少了约10%和12%(P＜0.01),细胞的生长速度明显变慢(P＜0.01).结论 初步证明了Skp2、p27基因在口腔鳞状细胞癌细胞分化增殖中所扮演的重要角色;筛选出了高效RNA干扰重组质粒Skp2shRNA-2、Skp2shRNA-3,为进一步研究以Skp2基因为靶点的人舌鳞状细胞癌基因治疗奠定了基础.

关键词：癌、鳞状细胞、舌肿瘤、基因疗法

所属期刊栏目：42

分类号：R73(肿瘤学)

在线出版日期：2007-12-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：624-628