沉默维生素D受体的表达对大鼠气道平滑肌细胞增殖及核因子-κB活化的影响

摘要：

目的:研究沉默维生素D受体（VDR）基因表达对气道平滑肌细胞（ASMC）增殖能力的影响，并初步探讨核因子-κB（NF-κB）在其中的作用。方法:构建特异性靶向大鼠VDR基因的RNA干扰慢病毒载体。实验分组为空白组、空载体组和干扰组。嘌呤霉素抗性筛选后建立VDR基因稳定沉默的大鼠ASMC细胞株。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖；流式细胞仪检测细胞生长周期；免疫荧光双标染色法检测 NF-κB p65的核易位情况；双荧光素酶报告基因法检测NF-κB依赖的转录活性，Western blotting法检测IκBα及p-IκBα蛋白的表达水平；放线菌素D处理细胞，检测IκBα mRNA的稳定性。利用SPSS 23.0统计软件，采用多组间单因素方差（One-Way ANOVA）分析； 组间两两比较采用SNK检验。结果:（1）与空白组与空载体组相比，干扰组ASMC的
A492 nm值及G
2/M期细胞比例显著高（
P<0. 05），而G
0/1细胞比例明显低（
P<0.05）。（2）干扰组ASMC中NF-κB亚单位p65发生明显核易位；其NF-κB报告基因的相对表达量（1.37±0.28）较空白组（1.00±0.19，
P=0.031）及空载体组（0.96±0.18，
P=0.027）明显高。（3）干扰组中IκBα的蛋白表达量（0.13±0.04）显著低于空白组（0.29±0.05，
P=0.023）及空载体组（0.32±0.07，
P=0.014）。相反，干扰组p-IκBα/IκBα为（0.86±0.04），显著高于空白组（0.41±0.07，
P=0.026）及空载体组（0.37±0.05，
P= 0.017）。（4）干扰组ASMC的IκBα mRNA半衰期（171.31±9.67） min，较空白组［（224.69±7.95） min，
P=0.032］及空载体组［（230.41±6.37） min，
P=0.035］明显短。
结论:沉默VDR的表达能促进ASMC的细胞增殖，这一作用与其活化ASMC中的NF-κB信号通路有关。

关键词：维生素D受体，骨化三醇、肌细胞、肌，平滑、细胞增殖、核因子-κB

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资助基金：福建省自然科学基金2020J11134，2016J01474;Natural Science Foundation of Fujian Province2020J11134, 2016J01474

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：537-542