结核分枝杆菌蛋白酶体抑制剂体外筛选模型的建立

摘要：

目的 建立 MTB蛋白酶体抑制剂体外筛选模型.方法 根据荧光底物N-琥珀酰基-亮氨酸-亮氨酸-缬氨酸-酪氨酸-7-氨基-4-甲基香豆素(S-LLVY-AMC)在蛋白酶体作用下发生水解,释放出具有荧光的7-氨基-4-甲基香豆素(AMC),且荧光值与蛋白酶体活性呈正比的原理,建立蛋白酶体抑制剂体外筛选模型,并对该体系中影响蛋白酶体活性的反应时间及十二烷基磺酸钠(SDS)、蛋白和底物浓度进行优化,利用已知蛋白酶体抑制剂MG132及8种天然产物对该模型进行验证.对荧光值的影响因素进行直线相关与回归分析.结果 MTB蛋白酶体抑制剂体外筛选模型中SDS为0.34 mg/L,蛋白浓度为25 mg/L,底物S-LLVY-AMC浓度为64 μmol/L,反应时间为30 min.利用MG132及药物A～H天然产物对MTB蛋白酶体筛选模型进行验证,经计算得出MG132半抑制浓度为49 μmol/L.在终浓度为200 μmol/L时,8种天然产物对MTB蛋白酶体的抑制率分别为0.0％、3.1％、7.8％、45.2％、52.4％、69.5％、69.6％和88.7％.证实该模型具有重复性及可靠性.结论 本研究成功建立MTB蛋白酶体抑制剂体外筛选模型,该模型为快速、较大规模筛选MTB蛋白酶体抑制剂提供良好的技术平台.

关键词：分枝杆菌、结核、蛋白酶体抑制剂

所属期刊栏目：36

分类号：R378.911;S852.618;R965

资助基金：国家自然科学基金;高等学校博士学科点专项科研基金;上海市教育委员会重点学科

在线出版日期：2013-07-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：363-366