Bcl-2基因沉默对A549细胞化疗药物杀伤敏感性的影响

摘要：

目的 探讨抑制Bcl-2基因表达对人肺癌A549细胞化疗药物杀伤敏感性及其相关基因mRNA表达的影响.为进一步提高非小细胞肺癌(NSCLC)化疗疗效提供实验依据.方法 构建靶向人Bcl-2基因的微小RNA重组质粒,并转染至A549细胞,设稳定转染的实验组、阴性对照质粒组和空白对照组,运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)琼脂糖凝胶电泳、实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测转染细胞中Bcl-2 mRNA转录和蛋白的表达水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和流式细胞术分析转染后细胞的增殖和周期变化.MTT法检测干扰后A549细胞对依托泊苷、5-氟尿嘧啶、顺铂、阿霉素、长春新碱、紫杉醇及长春瑞滨等7种化疗药物敏感性的变化.应用RT-PCR及实时荧光定量PCR方法进行核苷酸切除修复交叉互补基因1(ERCC1)、胸腺嘧啶合成酶(TYMS)、Ⅲ型β-微管蛋白(ClassⅢβ-tubulin)、拓扑异构酶2α(TOP2α)等化疗敏感性相关基因mRNA表达的检测.结果 成功构建微小RNA表达载体,稳定转染A549细胞后,实验组Bcl-2mRNA表达(相对表达量为0.002 ±0.001)与阴性对照质粒组(相对表达量为0.104±0.003)相比下降98.1％,蛋白表达水平下调57.6％(t值分别为98.70和7.66,均P＜0.05).流式细胞术测定实验组细胞周期阻滞在Gl期,MTT法检测示实验组细胞生长受到明显抑制,对依托泊苷、顺铂、紫杉醇、长春瑞滨等4种药物的敏感性明显增加[实验组IC50分别为(107.3±0.1) mg/L、(7.7±0.6)mg/L、(11.5±1.9) mg/L和(10.8±1.6) mg/L,阴性对照质粒组IC50分别为(145.8±0.1) mg/L、(60.7±1.4) mG/L、(80.6±1.7) mg/L和(20.6±1.7) mg/L],差异均有统计学意义(t值分别为655.33,108.04.82.16和12.48,均P＜0.05).此外,Bcl-2表达下调还使实验组ERCC1、TYMS、TOP2α基因的mRNA转录下降,与阴性对照质粒组相比分别下调99.6％、92.9％、96.1％(t值分别为689.79,689.37和768.04,均P＜0.05),但实验组ClassⅢβ-tubulin基因mRNA转录(1.154 ±0.008)升高,超过阴性对照质粒组(0.520 ±0.009)的122％(T-=160.07,P＜0.05).结论 靶向性抑制抗凋亡相关基因Bcl-2的表达可提高A549细胞对依托泊苷、顺铂、紫杉醇、长春瑞滨等化疗药物的敏感性,下调ERCC1、TYMS、TOP2α基因的表达.

关键词：基因、bcl-2、抗肿瘤药、RNA干扰、基因

所属期刊栏目：36

分类号：R734.2;R318;R979.1

资助基金：吉林省卫生厅科研项目2009Z081

在线出版日期：2013-06-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：191-197