单链构象多态性与核酸杂交联合检测耐氧氟沙星的结核分枝杆菌

摘要：

目的探讨聚合酶链反应-单链构象多态性分析 (PCR-SSCP)并Southern杂交检测耐氧氟沙星(OFLX)结核分枝杆菌的可行性,并探索结核分枝杆菌对OFLX敏感与耐药的界限.方法(1)体外筛选人工诱变的耐OFLX的耐药突变株,并检测OFLX对这些耐药株的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC).(2)扩增结核分枝杆菌的gyrA基因,包括H37Rv 1株、H37Ra 1株、临床分离的OFLX敏感株10株及人工诱变的耐OFLX H37Rv(17株)、H37Ra(17株)及临床分离菌株(51株)共计85株,并对此扩增产物进行SSCP分析及Southern 杂交,对比观察耐OFLX结核分枝杆菌的核酸单链条带位移的变化.为了验证PCR-SSCP并Southern杂交结果的可重复性,对36株临床分离的耐OFLX菌株的耐药界限进行初步检测.结果经PCR-SSCP及Southern 杂交,85株人工诱变的耐OFLX菌株,全部检测到gyrA基因突变.在OFLX 10 μg/ml这一点上,明显地存在着一个结核分枝杆菌对OFLX敏感与耐药并存的交叉区.对36株临床分离的OFLX耐药菌的PCR-SSCP合并Southern 杂交检测结果显示,对比标准株H37Ra,在临床分离的耐OFLX菌株间观察到了类似的因单链构象变化而引起的单链位移的结果.结论 PCR-SSCP合并Southern 杂交可以清晰地区分对OFLX敏感与耐药的菌株,以10 μg/ml为界作为判别结核分枝杆菌对OFLX是否已经产生耐药的标准是适宜的.

关键词：分枝杆菌、结核、氧氟沙星、突变、抗药性、微生物、多态现象、单链构象、核酸杂交

所属期刊栏目：28

分类号：R5(内科学)

资助基金：科技部科研项目G1999054104

在线出版日期：2006-03-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：841-844