10.3760/j:issn:1001-0939.2001.08.022
睡眠呼吸暂停综合征患者组织纤溶酶原激活物抑制物1 4G/5G基因多态性分析
@@ 睡眠呼吸暂停综合征(SAS)是一种睡眠呼吸障碍,因睡眠过程中反复呼吸浅慢或暂停,导致睡眠时出现低氧和高碳酸血症,与多种心血管系统疾病关系密切[1,2]。我们借助分子生物学技术,研究SAS患者组织纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)活性、含量与PAI-1 4G/5G基因多态性及mRNA表达的关系,以期为SAS与其他心血管系统疾病之间的相互关系提供分子水平的依据。
材料与方法 (1) 临床资料:依据睡眠呼吸监测的结果,将实验对象分为两组,正常对照组30例,其中男20例,女10例,平均年龄(56±11)岁; SAS组30例,其中男20例,女10例,平均年龄(57±9)岁。(2) 用发色底物法测定PAI-1活性,用ELISA法测定PAI-1含量。(3) DNA的提取采用盐析法[1]。RNA的提取采用TRIzol一步法(根据TRIzol试剂说明书)。(4) PAI-1 4G/5G基因多态性分析:加入上游引物(CACAGAGAGAGTCTGGACAC-GT)及下游引物(AGACC-AAGAGTCCTCTGTTGG)各15 pmol,经95℃预变性2 min,95℃变性60 s,58℃复性60 s,72℃延伸45 s,共进行35个循环,最后72℃延伸2 min。Bsl I 对扩增产物进行酶切。紫外灯下观察结果并拍照。(5) PAI-1 mRNA表达水平的测定:加入下游引物(GAGAACTTGGG-CAGAACCAG)25 pmol,进行逆转录,取5 μl逆转录反应产物,加入上游引物(CCACTTCTTCAGGCT-GTTCC)25 pmol及β-ectin(上游引物CCTCTAT-GCCA ACACAGTGC及下游引物GTAC-TCCTGCTTGCTG-ATCC)各25 pmol,经95℃预变性90 s,95℃变性30s,56℃复性60 s,72℃延伸60 s,共进行35个循环,最后72℃延伸10 min。(6) 经4.5%琼脂糖凝胶电泳,紫外灯下观察结果并拍照,得到的负片进行光密度扫描、定量。(7) 采用SPSS软件包对结果进行统计学分析。
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R56(呼吸系及胸部疾病)
2004-01-15(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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