睡眠呼吸暂停综合征患者组织纤溶酶原激活物抑制物1 4G/5G基因多态性分析

摘要：

@@ 睡眠呼吸暂停综合征(SAS)是一种睡眠呼吸障碍，因睡眠过程中反复呼吸浅慢或暂停，导致睡眠时出现低氧和高碳酸血症，与多种心血管系统疾病关系密切［1，2］。我们借助分子生物学技术，研究SAS患者组织纤溶酶原激活物抑制物1（PAI-1）活性、含量与PAI-1 4G/5G基因多态性及mRNA表达的关系，以期为SAS与其他心血管系统疾病之间的相互关系提供分子水平的依据。
材料与方法 (1) 临床资料：依据睡眠呼吸监测的结果，将实验对象分为两组，正常对照组30例，其中男20例，女10例，平均年龄（56±11）岁； SAS组30例，其中男20例，女10例，平均年龄（57±9）岁。(2) 用发色底物法测定PAI-1活性，用ELISA法测定PAI-1含量。(3) DNA的提取采用盐析法［1］。RNA的提取采用TRIzol一步法（根据TRIzol试剂说明书）。(4) PAI-1 4G/5G基因多态性分析：加入上游引物（CACAGAGAGAGTCTGGACAC-GT）及下游引物（AGACC-AAGAGTCCTCTGTTGG）各15 pmol，经95℃预变性2 min，95℃变性60 s，58℃复性60 s，72℃延伸45 s，共进行35个循环，最后72℃延伸2 min。Bsl I 对扩增产物进行酶切。紫外灯下观察结果并拍照。(5) PAI-1 mRNA表达水平的测定：加入下游引物（GAGAACTTGGG-CAGAACCAG）25 pmol，进行逆转录，取5 μl逆转录反应产物，加入上游引物（CCACTTCTTCAGGCT-GTTCC）25 pmol及β-ectin（上游引物CCTCTAT-GCCA ACACAGTGC及下游引物GTAC-TCCTGCTTGCTG-ATCC）各25 pmol，经95℃预变性90 s，95℃变性30s，56℃复性60 s，72℃延伸60 s，共进行35个循环，最后72℃延伸10 min。(6) 经4.5%琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察结果并拍照，得到的负片进行光密度扫描、定量。(7) 采用SPSS软件包对结果进行统计学分析。

机标关键词：睡眠呼吸暂停综合、患者、组织、纤溶酶原激活物抑制物、心血管系统疾病、引物、基因多态性分析、平均年龄、观察结果、预变性、琼脂糖凝胶电泳、分子生物学技术、紫外灯、下游、睡眠呼吸障碍、睡眠呼吸监测、上游、逆转录、测定、统计学分析

所属期刊栏目：24

分类号：R56(呼吸系及胸部疾病)

在线出版日期：2004-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共2页

页码：505-506