双启动子杆状病毒介导131I肿瘤靶向治疗的实验研究

摘要：

目的 构建由人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控的NIS基因以及由早期生长应答因子1(Egr1)启动子调控的人纤溶酶原Kringle 5(K5)基因的双启动子重组杆状病毒载体,探讨同时靶向肿瘤细胞与血管内皮细胞的基因治疗模式的可行性.方法 将h TERT启动子和NIS基因片段以及Egr1启动子和K5基因片段分别亚克隆至杆状病毒载体,经草地贪夜蛾卵巢细胞(Sf9)包装并扩增得到重组杆状病毒(Bac-h TERT-NIS-Egr 1-K5),同时将CMV启动子调控的重组杆状病毒(Bac-CMV-NIS-Egr1-K5)以及不含NIS基因或不含K5基因的重组杆状病毒(Bac-h TERT-0-Egr 1-K5、Bac-hTERT-NIS-Egr1-0)作为对照组.采用荧光定量PCR及Western blot分析NISmRNA和蛋白在人宫颈癌细胞HeLa中的靶向表达,以及131I辐射对K5 mRNA和蛋白的表达调控.通过摄碘实验、NaClO4抑制实验以及细胞增殖抑制实验验证NIS蛋白的功能及由其介导的131I抑瘤作用.通过细胞凋亡实验评估K5蛋白对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的促凋亡作用.统计学检验采用方差分析.结果 成功构建重组杆状病毒Bac-hTERT-NIS-Egr1-K5.荧光定量PCR及Western blot显示肿瘤特异性启动子hTERT介导的NIS基因仅在HeLa细胞中有表达,而在正常肺纤维细胞MRC5中无表达.131I可以调控辐射敏感启动子Egr1下游K5基因的转录和翻译.细胞摄碘实验显示Bac-hTERT-NIS-Egr1-K5感染的HeLa细胞摄碘增加了5.6倍,与未加NaClO4组比,其摄碘能被NaClO4显著抑制(F=199.296,P＜0.05).131I对Bac-h TERT-NIS-Egr 1-K5感染的HeLa细胞的抑制效果明显,细胞存活率仅为38.3％.Bac-hTERT-NIS-Egr1-K5感染的HUVEC细胞在131I照射下的凋亡率(30.8％)显著高于Bac-h TERT-NIS-Egr1-0组和未加病毒组(11.2％和10.9％,F=19.926、45.409,均P＜0.05).结论 重组杆状病毒Bac-h TERT-NIS-Egr 1-K5可使NIS基因在肿瘤细胞中靶向表达并介导131I的摄取,同时还可通过131I照射调控血管内皮细胞K5基因的表达,为开展体内NIS介导的131I摄取与K5介导的抗血管生成的协同治疗研究提供了实验依据.

关键词：杆状病毒科、端粒、末端转移酶、钠碘转运体、早期生长应答因子1、肿瘤细胞、培养的、内皮细胞、培养的、碘放射性同位素、基因治疗

所属期刊栏目：34

分类号：R730.5;R979.1;R34

资助基金：国家自然科学基金;上海市卫生局青年科研项目

在线出版日期：2015-04-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：484-489