hNIS基因介导碘摄取测量microRNA let-7在肺腺癌A549细胞中的表达

摘要：

目的 拟建立用放射性核素测量mieroRNA(即miRNA)在肿瘤细胞中表达的新方法 ,探讨miRNA与肿瘤的关系.方法 分别克隆人钠/碘同向转运体(hNIS)及可与let-7互补结合的ras 基因的3'非翻译区(3'-UTR),即RU序列;以hNIS作为报告基因,将ras基因的3'-UTR与hNIS连接构建融合基因(hNIS-RU),使Hnis的表达受let-7的调控;同时克隆前体let-7(pri-let-7)及前体mir143(pri-mir143),转入细胞后加工形成成熟的let-7及mir143.将hNIS及hNIS-Ru分别转染肺腺癌A549细胞,转染24 h后,于培养液中分别加入37 kBq ~(125)I,1h后收集细胞并测量~(125)I计数;将hNIS-Ru分别与不同量的pri-let-7或pri-mir143共转染A549细胞,转染细胞24 h后分别测量其对Na~(125)I的摄取.结果 转染hNIS的A549细胞~(125)I摄取明显增高,是未转染A549细胞的12倍;转染hNIS-RU的A549细胞~(125)I的摄取减低,为转染hNIS A549细胞的70%,是未转染A549细胞的8倍;hNIS-Ru及pri-let-7共转染A549细胞的放射性计数进一步降低,为转染hNIS A549细胞的50%;转染hNIS-Ru不变,增加pri-let-7的转染量,~(125)I的摄取随pri-let-7的增加而降低;转染hNIS-Ru不变,共转染不同浓度的pri-mir143,A549细胞对~(125)I的摄取基本不变.结论 构建了hNIS-Ru融合基因,hNIS在细胞中的表达受let-7的调节,二者呈反比关系.初步建立了以hNIS为报告基因测量miRNA在细胞中表达的高灵敏度放射性核素新方法.

关键词：肺肿瘤、基因、钠/碘同向转运体、MicroRNA

所属期刊栏目：29

分类号：R735.7;R335;R541.4

在线出版日期：2010-03-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：379-382