131I-FIAU在不同载体介导的HSV1-tk转导心肌细胞中的实验研究

摘要：

目的 为以单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因(HSVI-tk)为报告基因的核素心脏显像寻找合适的载体并提供依据.方法 以胶原酶单次消化法获得乳鼠原代心肌细胞,分别应用重组腺病毒AdS-HSV1-tk(Ad5-tk)和脂质体lipofectamineTM2000包裹的重组质粒pDC316-tk(pDC316-tk/lipo-plex)将报告基因HSV1-tk转导人细胞,以空载体腺病毒作为对照;采用Iodogen固相氧化法对特异性报告探针氟-碘阿糖呋喃基脲嘧啶(FIAU)进行131I标记,经Sep-Pak C18反相色谱层析柱纯化后,测定标记物的标记率和放化纯;比较各组细胞对131I-FIAU的摄取情况,并应用半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学方法,在mRNA和蛋白质水平检测不同载体介导HSVI-tk转导心肌细胞后HSV1-tk的表达.结果 131I-FIAU的标记率为(53.82±2.05)%,放化纯为(94.85±1.76)%.标记物在体外稳定存在;转导后5h,Ad5-tk感染组和pDC316-tk/lipoplex转染组对131I-FIAU的摄取率分别为(12.55±0.37)%、(2.09±0.34)%,且各时间点摄取率前者均明显高于后者(t=12.978-38.253,P均<0.01);2种载体介导心肌细胞转导后24 h,RT-PCR即可检测纠HSVI-tk mRNA 的表达,且Ad5-tk感染组的表达水平明显高于pDC316-tk/lipoplex转染组(3.11±0.14与1.60±0.05,t=17.663,P<0.01);免疫细胞化学检测中二者阳性率分别为(81.70±0.40)%、(22.06±0.32)%,差异有统计学意义(t=23.237,P<O.01).结论 腺病毒载体介导HSV1-tk感染心肌细胞的效率和对标记探针的摄取率均明显高于脂质体介导组,其可做为活体报告基因心脏显像的载体,可得到更为清晰的显像图.

关键词：心肌、细胞、培养的、基因、转导、遗传、碘放射性同位素、阿糖呋哺脲嘧啶

所属期刊栏目：29

分类号：R5(内科学)

资助基金：国家自然科学基金30400176

在线出版日期：2009-06-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：126-130