谷氨酸脱羧酶抗体微量平板放射结合检测法的建立与初步应用

摘要：

目的 建立谷氨酸脱羧酶抗体(GAD-Ab)的微量平板放射结合检测(RBA)法并评价其I临床价值.方法 采用35S-GAD65抗原与血清在96孔平板中保温24 h,而后转入已包被蛋白A的Millipore平板中,平板经洗涤后进行放射性计数,GAD-Ab结果以WHO标准单位(U/ml)表示.检测224名健康人、162例1型糖尿病(T1DM)和210例初诊2型糖尿病(T2DM)患者GAD-Ab浓度,评价其临床应用效果.并分别选择经典放射配体(RLA)法检测GAD-Ab指数呈梯度排列的T1DM患者和健康人共119名,比较RBA法和RLA法检测结果的一致率和相关性.对32名健康人、35例T1DM患者、24例T2DM患者同时采集静脉血和手指血,探索该方法检测手指血GAD-Ab浓度的可行性,同时也与RLA法比较.分别采用直线相关分析、t检验、方差分析、受试者工作特征(ROC)曲线等方法进行统计学处理.结果 (1)优化的检测条件包括采用2μl血清与3×104计数·min-1的标记抗原缓慢振荡保温24 h,采用4℃ PBS缓冲液洗涤沉淀物10次,采用Optiphase Supermix型闪烁液测量放射性计数.(2)该法检测GAD-Ab批内CV为3.8%～10.2%,批间CV 5.6%～11.9%;GAD-Ab浓度在40.3～664 U/ml范围内线性良好,检测限为3.6 U/ml;该方法灵敏度78%,特异性98%,与经典RLA法结果判定一致率97.5%,Kappa值0.95,两者检测值呈显著正相关(r=0.915,P<0.001).(3)GAD-Ab在TIDM和T2DM患者阳性率分别为46.9%(76/162)和5.2%(11/210),明显高于健康人的0.89%(X2值为123.5和10.1,P<0.001和<0.01).(4)该方法检测手指血GAD-Ab与经典RLA法检测静脉血结果判定一致率96.7%,Kappa值0.905,检测结果呈显著正相关(r=0.946,P<0.001).结论 建立的微量平板RBA法灵敏度、特异性、重复性好,能适用于末梢血GAD-Ab检测,具有较好的临床应用价值.

关键词：谷氨酸脱羧酶、抗体、放射免疫测定、糖尿病、胰岛素依赖型、非胰岛素依赖型

所属期刊栏目：28

分类号：R9(药学)

资助基金：国家自然科学基金30670991;卫生部优秀青年人才科研项目Q9420;湖南省科技厅科研项目06FJ3155

在线出版日期：2008-12-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：339-343