10.3760/cma.j.issn.2095-2848.2001.01.024
99Tcm-octreotide体外受体结合法及其结合特性研究
@@直接标记法制备99Tcm-octreotide 已获得成功[1],但标记过程的化学处理有可能影响受体结合特性,因此,笔者进行了体外细胞膜放射受体分析研究,以便为临床受体显像提供实验依据。
一、材料与方法
1.膜受体结合方法学研究。99Tcm-octreotide纯化后放化纯为93.8%,放射性比活度649 TBq/mol[1],采用Wistar大鼠脑皮质细胞膜进行体外受体结合分析,其制备方法参照文献[2],有改进。细胞膜蛋白质质量浓度为0.32 g/L。按照体外放射受体分析的一般流程,首先进行最大结合活性测定,取定量99Tcm-octreotide 5×10-7 mol/L,细胞膜量逐级增加,直到过量,进行结合反应,以滤膜放射性总结合TB(放射性计数)与加入
99 Tcm-octreotide量T(放射性计数)的比值得最大结合率,即为99Tcm-octreotide的最大结合活性。其次以最大结合率为标准,分别改变反应体系中温度、保温时间、细胞膜和标记肽用量、分离条件等相关因素,按照受体分析流程进行分离和测定,以确定细胞膜受体结合反应的最佳条件。最后通过观察同一细胞膜在同一次结合实验中的变异系数CV1(n=5组)和同一细胞膜在不同天进行结合实验的变异系数CV2(n=5次),研究最佳结合反应条件的可重复性。非特异性结合(NSB)包括细胞膜组织本身的NSB(采用竞争抑制曲线法)和实验材料(滤膜、试管等)的NSB。
2.受体结合特性研究。①饱和实验:TB组测定,在系列试管中依次加入细胞膜60 μL,标记肽(1~10)×10-7 mol/L,级差1×10-7 mol/L。NSB组测定,在系列试管中除上述试剂外,每管还须加入octreotide 2 μg,使细胞膜受体特异性结合受到充分抑制。两组试管均用含0.5% BSA Tris缓冲液补足至200 μL,25 ℃保温90 min,快速通过滤膜终止结合反应,测滤膜放射性即为TB或NSB,最后求得亲和常数KD和受体最大结合容量Bmax。②竞争抑制实验:在系列试管中依次加入细胞膜60 μL,标记肽5×10-7 mol/L, 非标记肽量10-12~10-5mol/L,级差10-1 mol/L,在相同反应条件下结合并终止反应。③对照物99Tcm-oxytocin体外结合实验:参照上述方法进行。
体外受体、结合法、细胞膜、受体结合、结合反应、放射性计数、实验、放射受体分析、标记肽、特异性结合、试管、膜受体、滤膜、竞争抑制、结合特性、结合活性、方法、反应条件、测定、变异系数
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R81(放射医学)
国家自然科学基金39470219
2004-01-08(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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