131I-BAC5和CT-BAC5联合应用对鼻咽癌CNE-2细胞微球的作用

摘要：

@@笔者利用体外培养的鼻咽癌(NPC)多细胞微球模拟体内实体瘤环境，观察抗NPC单克隆抗体(McAb) BAC5与中华眼镜蛇膜毒素(CT)及131I偶联物对体外培养NPC CNE2细胞微球的抑制或破坏作用，旨在为NPC的治疗探索一种新的方法。
材料与方法
1.McAb制备。McAb BAC5为小鼠IgG1亚型，由腹水抗体经正辛酸-硫酸铵盐析法粗提后，经离子交换法层析制得［1］。
2.CT。由广州医学院蛇毒研究所提供。
3.碘标记物的制备。BAC5和小鼠IgG的131I标记用氯胺-T法，125I-CT的制备用Iodogen法，标记物的纯化用Sephadex G-25柱层析法，纸层析法测其放射化学纯度>95%。
4.BAC5和125I-CT的偶联。利用异型双功能偶联剂3-(2-吡啶乙基)丙酸-N-琥珀酰亚胺酯(SPDP，Sigma产品)，参照文献［2］，将2个蛋白质分子偶联制备125I-CT-BAC5，经Sephadex G-100柱层析纯化，以SDS-PAGE和放射自显影分析其纯度。
5.CNE-2细胞微球的培养。根据Chen等［3］报道的方法，将CNE-2细胞制成1 000个细胞/5 mL RPMI 1640完全培养液，加入用质量分数0.75%琼脂糖铺底的6孔培养板中，连续培养10 d，待微球长到300 μm时，全部吸到一带盖的消毒离心管中，自然沉降，去上清，再加5 mL培养液轻轻将沉底吹起，再自然沉降，去上清，以5 mL培养液将沉底轻轻吸到一培养皿中，用吸管挑取大小接近、较圆的微球，放到质量分数0.75%琼脂糖铺底的24孔培养液中，每孔5个，继续培养至400 μm左右。
6.治疗实验。每组5个微球，加0.6 mL培养基，0.4 mL治疗液。①对照组：自然生长微球，生理盐水0.4 mL；125I-CT组：8.6×10-7 mol/L; 131　I-mIgG组：1.11×1010 Bq/L；②131I-BAC5组：1.11×1010 Bq/L;③125I-CT-BAC5组：CT含量8.6×10-7 mol/L;④联合治疗组：125I-CT-BAC5 8.6×10-7 mol/L+ 131　I-BAC5 11.1 GBq/L。治疗24 h后更换新鲜培养液，每3 d更换1次。
7.疗效观察。用倒置显微镜测量微球直径，在治疗时及治疗后每天测量微球的直径，不断观察微球形态结构的变化，根据微球的体积计算公式为V=短径2×长径/2，绘制治疗天数与体积比曲线，即days-V/V0微球生长曲线(V0为治疗前微球的平均体积，V为某实验点微球的平均体积)。
8.微球放射性摄取量。在微球培养液中给药，2 h后用吸管将各组的微球吸出(自然生长对照组除外)，用培养基洗涤后，移到带盖的试管中，在γ计数器上测量，然后放回原培养孔，给药24 h后重复测量1次。

机标关键词：联合应用、鼻咽癌、细胞、微球形态结构、培养液、治疗、自然生长、自然沉降、质量分数、体外培养、平均体积、偶联、柱层析、测量、琼脂糖、培养基、放射化学纯度、方法、对照组、标记物

所属期刊栏目：21

分类号：R81;R73(放射医学)

资助基金：国家自然科学基金39370781;广东省自然科学基金940486

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：33-35