不同抗凝剂保存液对脐血培养的NK细胞增殖及杀伤效应的影响

摘要：

目的:探讨不同抗凝剂保存液对脐血培养的NK细胞增殖及杀伤效应的影响。方法:无菌采集健康孕妇20 ml脐血共10例，分别放入肝素钠和血液保存液的抗凝管中。用淋巴细胞液分离脐血单个核细胞（CBMC），在体外扩增培养NK细胞，分别于培养0、3、6、9、12、15、18、21 d进行细胞计数。在第15天和第21天通过流式细胞仪检测CD3-CD56+、CD16+NK细胞比例以及细胞凋亡率。在第15天用CCK8法按照效靶比5∶1、10∶1、20∶1检测两组抗凝剂收集CBMC，在体外扩增获得的NK细胞对人肝癌细胞株（SMMC7721、BEL7402、Sk-hep1、HepG2、Hep3B、Huh7）的细胞毒作用。两组细胞数目等比较采用t检验；多组比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验。结果:体外培养第9天开始NK细胞均呈对数生长，培养至第15天后细胞增殖能力下降，细胞数量减少。细胞生长曲线显示，第9、15、21天肝素钠组NK细胞数目分为（1.8±0.8）×108、（6.2±1.9）×108、（4.9±1.3）×108个，明显高于血液保存液组的（1.0±0.5）×108、（4.3±2.0）×108、（3.4±1.9）×108个（t=2.797，2.198，2.177；P<0.05）。NK细胞对肝癌细胞株的细胞毒作用显示，NK细胞对6株人肝癌细胞的细胞毒作用随着效靶比增加而增强，在效靶比20∶1时杀伤效率最高，其中对SMMC7721杀伤作用最强，而两组杀伤率无明显差异（P>0.05）。结论:肝素钠和血液保存液均可作为脐血NK细胞培养的抗凝剂，肝素钠可增强NK细胞增殖能力，但不增加对肝癌细胞的杀伤效应。

关键词：NK细胞、细胞杀伤效应、细胞毒作用、肝癌细胞、抗凝剂、肝素钠、血液保存液

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资助基金：广东省药品监督管理局科技创新项目2021TDB22

在线出版日期：2023-09-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：572-576