10.3760/cma.j.cn121113-20210201-00098
二甲双胍通过TET2-Foxo3a途径对脊髓损伤的抗凋亡机制研究
目的:通过组织学、RT-PCR及功能评估等实验方法,探讨二甲双胍对脊髓损伤大鼠抗凋亡的调控机制。方法:建立大鼠脊髓损伤模型,通过Basso-Beattie -Bresnahan locomotor rating scale(BBB)评分和斜板试验评估大鼠后肢运动功能的恢复。通过TTC染色比较脊髓组织坏死面积的改变。分离提取大鼠脊髓组织,通过Dot-blot分析、免疫组化检测DNA的羟甲基化水平。通过qPCR、Western Blot检测TET2mRNA及蛋白表达水平,并通过抑制TET2的表达来检测脊髓损伤范围的改变。通过免疫印迹及免疫共沉淀检测TET2与Foxo3a的相互作用。通过RT-PCR分析检测Foxo3a下游相关基因表达水平的变化。结果:与SCI+NS组相比,SCI+MET组使用二甲双胍治疗后脊髓组织的坏死面积明显减少,BBB评分及斜板试验评分更高(
P<0.05)。同时我们发现与对照组相比,SCI大鼠24h后TET2mRNA和蛋白水平升高,DNA的5-hmC水平升高。而SCI后使用二甲双胍治疗,TET2mRNA和蛋白水平、5-hmC水平进一步升高。与SCI+MET组相比,使用了SC-1后DNA的5-hmC水平降低,坏死的面积较前增加。SCI后Bim,P27kip,Bax的mRNA水平显着增加。二甲双胍治疗后,Bim,Bax的mRNA水平较SCI+NS组降低(
P<0.05)。SCI损伤后Bim,P27kip,Bax的相对5-hmC水平显着增加。二甲双胍治疗后Bim和Bax的相对5-hmC水平降低(
P<0.05)。
结论:二甲双胍能促进TET2和Foxo3a的相互作用,提升整体DNA的5-hmC水平,抑制相关凋亡基因的表达,从而改善脊髓损伤后的组织损伤及神经功能恢复。
脊髓损伤、二甲双胍、遗传学研究、大鼠、给药对照
41
国家自然科学基金面上项目82072423;江苏省卫生健康委员会面上项目H2018022;National Natural Science Foundation of China82072423;General items of Jiangsu Health CommitteeH2018022
2023-05-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共11页
584-594